gastric

  • obiecte
  • abstract
  • introducere
  • Pacienți și metode
  • Pacienți, tratamentul și evaluarea tumorilor
  • Colorare imunohistochimică și evaluare
  • analize statistice
  • Rezultatul
  • Proprietăți clinico-patologice
  • Diferențe de prognostic între DLBCL gastric HP-pozitiv și negativ gastric „pur”
  • Semnificația prognostică a expresiei CagA în DLBCL gastric "pur"
  • discuţie
  • Informatii suplimentare
  • Fișiere Excel
  • Tabel suplimentar 1
  • Fișiere Powerpoint
  • Figura suplimentară 1

obiecte

  • Limfom cu celule B
  • chimioterapie
  • Cancer la stomac
  • Helicobacter pylori

abstract

Am arătat recent că celulele B mari (pure) gastrice difuze (DLBCL) pozitive pentru Helicobacter pylori (HP) pot răspunde la terapia de eradicare a HP. Cu toate acestea, nu este clar dacă aceste DLBCL gastrice „pure” asociate cu HP pot fi fundamental diferite de cele care nu au legătură cu HP. În acest studiu, am comparat caracteristicile clinicopatologice ale acestor două grupuri de pacienți care au fost tratați uniform cu chimioterapie convențională. Patruzeci și șase de pacienți au fost clasificați ca HP pozitivi și 49 ca HP negativi conform criteriilor convenționale. Pacienții cu HP-pozitiv au avut scoruri mai mici ale indicelui internațional de prognostic (0-1, 65% față de 43%, P = 0,029), stadiu clinic mai scăzut (I-IIE1, 70% față de 39%, P = 0,003), răspuns tumoral mai bun la chimioterapie (răspuns patologic complet, 76% vs. 47%, P = 0,004) și supraviețuire semnificativ mai bună la 5 ani fără evenimente (EFS) (71,7% vs. 31,8%, P 1, 2 Recent, am raportat că proporția pacienților cu DLBCL gastric „pur” poate fi tratată cu terapie de eradicare a HP.3 Aceste descoperiri sugerează că DLBCL „pur” gastric poate fi subdivizat în subtipuri legate de HP și subtipuri conexe. Cele două grupuri de tumori gastrice pot diferi între ele. în origine celulară, mecanisme de carcinogeneză și proprietăți clinicopatologice.

Pentru a examina diferențele dintre cele două grupuri de tumori, am examinat toți pacienții cu DLBCL gastric primar „pur” care au fost tratați cu chimioterapie convențională ca terapie de primă linie și le-am împărțit în continuare în grupuri HP-pozitive și -negative pe baza prezenței. sau absența infecției cu HP. Am analizat descoperirile histomorfologice, subclasificarea moleculară, stadiul clinic, scorurile indicelui internațional prognostic (IPI), răspunsul tumorii la chimioterapie, supraviețuirea fără evenimente și supraviețuirea globală (OS) la aceste două grupuri de pacienți. Deoarece HP poate fi o infecție accidentală inocentă în anumite cazuri HP-pozitive, am investigat în continuare grupul HP-pozitiv pentru expresia tumorii CagA, un marker pe care l-am găsit recent util în detectarea severității directe a HP a limfomului gastric MALT de grad scăzut. 4 Rezultatele noastre au sugerat că DLBCL gastric „pur” legat de HP, în special expresia CagA, este o entitate distinctă asociată cu un comportament tumoral mai puțin agresiv și cu un prognostic mai bun al pacientului.

Pacienți și metode

Pacienți, tratamentul și evaluarea tumorilor

Au fost examinate înregistrările medicale și specimenele patologice ale pacienților consecutivi cu DLBCL gastric primar confirmat histologic care nu aveau dovezi histologice de origine MALT. Toți acești pacienți au fost diagnosticați în unitățile noastre de la 1 ianuarie 1999 până la 30 decembrie 2009. Pacienții cu caracteristici histologice ale limfomului MALT, inclusiv infiltrarea densă a celulelor asemănătoare centrocitelor în lamina propria și leziunile limfoepiteliale tipice, au fost excluși și probele ulterioare. Probele 5, 6, 7 au fost colorate imunohistochimic cu CD20, CD5, CD3 și CD43 în scopuri de diagnostic de rutină. În acest studiu, numărul mediu de biopsii gastrice pentru fiecare pacient a fost de 6 (interval, 2-23). Prezența infecției cu HP a fost confirmată în fiecare caz prin examinarea histologică, testul ureazei sau cultura bacteriană. 3, 8

Producțiile au inclus examinarea fizică cu examinarea inelului Waldeyer, istoricul detaliat, hemograma cu număr diferit de leucocite, evaluarea lactatului dehidrogenazei serice (LDH), scanarea tomografică calculată a toracelui, abdomenului și bazinului, aspirația și biopsia măduvei osoase, ateroscleroza gastrointestinală superioară sau tomografie cu emisie de pozitroni a fluor-oxigenglucozei fluor-18. Stadializarea și clasificarea leziunilor s-au bazat pe modificarea de către Musshoff a sistemului de stadializare Ann Arbor. Diagnosticul de DLBCL gastric primar "pur" trebuie să îndeplinească criteriile modificate ale lui Lewin și colab. 9 și Herrmann și colab.: 10 (1) prezența leziunii gastrice predominante, cu sau fără expansiune la ganglionii limfatici regionali și fără afectarea ganglionilor limfatici distali; (2) frotiuri de sânge periferic care nu au dezvăluit nicio anomalie leucemică sau limfatică. 11 Această definiție exclude și pacienții cu afectare gastrică care au fost diagnosticați după un limfom extraabdominal diagnosticat anterior. Unsprezece pacienți au fost stratificați prin IPI pentru limfom non-Hodgkin de grad moderat și înalt. 12

Chimioterapia sistemică constând fie în regimuri care conțin antraciclină sau antracenedionă, fie regimuri care conțin rituximab a fost administrată ca tratament inițial tuturor pacienților cu DLBCL gastric primar „pur”. Pentru a exclude factorii de confuzie (de exemplu, terapia sincronă utilizând terapia de eradicare a HP și chimioterapia, aceasta poate crește eficacitatea tratamentului cu DLBCL gastric 13), pacienții care au primit tratament primar fie cu rezecție chirurgicală, terapie de eradicare cu HP sau terapie combinată cu Terapia de eradicare a HP și chimioterapia.din acest studiu. Chirurgia și radioterapia locală au fost rezervate pacienților a căror boală localizată nu a răspuns la chimioterapie sau care au dezvoltat complicații legate de tratament care necesită tratament suplimentar. Fiecare pacient a fost supus unui examen endoscopic ulterior cu o biopsie a leziunilor suspectate și un examen imagistic care documentează răspunsul lor la chimioterapie. Tumorile au fost considerate chimiosensibile dacă remisiunea patologică completă (pCR) a fost documentată după chimioterapie. Revizuirea patologică și studiile genetice ale țesuturilor tumorale arhivate au fost aprobate de Comitetul de control instituțional al Spitalului Național Universitar din Taiwan.

Colorarea și evaluarea imunohistochimică

Colorare imunohistochimică pentru CagA (A10; sc-28368; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, SUA), SHP-2 fosforilat (p-SHP-2) (Thy542; AF3790; R&D Systems, Minneapolis, MN, SUA), CD10 (clona 56C6; Novocastra, Newcastle upon Tyne, Marea Britanie), BCL6 (clona PG-B6p; Dako, Glostrup, Danemarca) și MUM-1 (clona MUM-1p; Dako) au fost efectuate pe secțiuni de probe de biopsie endoscopică înainte de tratament, care au fost încorporate în parafină., 4, 14, 15, 16, 17 Vizualizarea a fost efectuată utilizând metoda imunoperoxidazei indirecte (tampon de colectare, tampon de citrat de sodiu, pH 6,0) conform instrucțiunilor producătorului. Scorarea pentru CagA, p-SHP-2, CD10, BCL6 sau MUM-1 a fost efectuată independent de către patologi specialiști fără cunoștința datelor clinice.

Pentru producătorul de CagA și p-SHP-2, expresia pozitivă a fost definită ca

10% din celule cu imunocolorare moderată sau puternică (celule tumorale cu o pată maro ușor vizibilă care indică în mod clar nucleul celulei tumorale sau citoplasma), așa cum este descris mai sus. 4, 14 Pentru markerii CD10, BCL6 sau MUM-1, expresia pozitivă a fost definită ca colorarea pozitivă a> 20% din celule așa cum s-a descris mai sus. 15, 16 Pentru BCL6 și MUM-1, numai colorarea nucleară difuză sau granulară a fost pozitivă; pentru CD10 a existat doar o colorare pozitivă a membranei. Rezultatele expresiei CD10, BCL6 și MUM-1 au fost folosite pentru a clasifica toate tumorile în subgrupuri de celule B de centru germinal (GCB) sau subgrupuri non-GCB așa cum s-a descris anterior. 15, 16

analize statistice

Testul χ2 și testul exact al lui Fisher au fost utilizate pentru a compara caracteristicile clinice, caracteristicile patologice și subclasificarea histologică a acestor două subgrupuri de tumori. Analiza a fost efectuată utilizând date de urmărire disponibile la 31 decembrie 2012. Supraviețuirea fără evenimente (EFS) a fost numărată de la începutul tratamentului până la progresia bolii, recidivă, întreruperea pentru orice motiv sau deces. OS a fost calculat de la data tratamentului inițial până la data decesului din orice cauză. Supraviețuirea a fost estimată utilizând metoda Kaplan-Meier și comparată utilizând testul log-rank. Toate variabilele de prognostic care s-au dovedit a fi semnificative în analiza univariată au fost incluse în analiza multivariantă utilizând modelul de regresie a riscurilor proporționale Cox. Diferențele dintre rezultatele testelor comparative au fost considerate semnificative statistic dacă valoarea P cu două cozi a fost 15 (Figura 1 suplimentară), nu am observat diferențe în distribuția GCB și non-GCB între pacienții cu DLBCL gastric pur HP pozitiv. și omologii lor negativi pentru HP (Tabelul 1).).

Diferențe de prognostic între DLBCL gastric HP-pozitiv și negativ gastric „pur”

La o urmărire mediană de 5,6 ani, EFS pe 5 ani și SG la toți pacienții au fost de 53,4% și respectiv 57,6%. Dintre pacienții cărora li s-au administrat regimuri pe bază de rituximab/antraciclină (n = 22), EFS și OS pe 5 ani au fost de 77,2%, respectiv 83,1%, în timp ce EFS și OS pe 5 ani au fost 52,3% și, respectiv, SO 57,4%, pentru pacienții cu SO cu chimioterapie pe bază de antraciclină (n = 61; Tabelul 1). Dintre pacienții cu regimuri fără antraciclină (n = 12), EFS pe 5 ani și OS au fost de 41,7%, respectiv 50,0%. Tabelul 1 suplimentar prezintă EFS și OS pe cinci ani pentru diferitele etape ale pacientului (stadii localizate I-IIE1, I-IIE2 și III-IV).

Pacienții cu DLBCL gastric "pur" gastric cu HP-pozitiv au prezentat un EFS și OS pe 5 ani semnificativ mai bun decât pacienții cu HP-negativi (EFS pe 5 ani, 71,7% față de 31,8%, P

Atribuirea statutului HP la rezultatul clinic în DLBCL gastric „pur”. A ) Relația HP cu EFS. b ) Relația HP cu sistemul de operare.

Imagine la dimensiune completă

Am testat efectele caracteristicilor clinice și stării infecției HP asupra EFS și OS folosind analize univariate care au relevat prezența a șase factori de prognostic dăunători semnificativi pentru EFS: (1) vârsta mai în vârstă (P = 0,048); (2) stadiu clinic avansat (P 4 43 HP pacienți pozitivi cu probe tumorale disponibile pentru expresia CagA. Proteina CagA a fost exprimată în celulele tumorale ale mucoasei gastrice sau submucoase și a prezentat expresie împrăștiată în mucoasa gastrică adiacentă fără tumori (Figura 2). și colorarea imunohistochimică a arătat că majoritatea celulelor CagA-pozitive au fost morfologic anormale și au exprimat CD20 (Figura 2). %) din 27 de cazuri CagA pozitive versus 4 (25,0%) din 16 cazuri CagA-negative, P = 0,016) Comparativ cu 16 cazuri HP-pozitive dar CagA-negative, 27 de pacienți care au fost HP- și CagA-pozitivi, mai mici stadiul clinic (I-IIE1, 82% față de 47%, P = 0,017), răspuns mai bun al tumorii la chimioterapie (răspuns complet, 89% față de 59% P = 0, 030) și EFS semnificativ mai bun pe 5 ani (85,2% vs. 46,3%, P = 0, 002) și OS (88,9% față de 52,9%, P = 0,003) (Figura 3).

Exemple de analiză imunohistochimică a proteinei CagA pe celule tumorale DLBCL "pure" gastrice. A ) Celulele mari difuze care pătrund în mucoasă sunt observabile la examenul histopatologic (hematoxilin-eozină (H&E), × 400) (săgeată, HP). b ) Celulele mari difuze care se infiltrează în submucoasă sunt observabile la examinarea histopatologică a unui caz HP pozitiv (H&E, 400). ( c ) Același caz pozitiv pentru HP ( b ) prezintă expresia CagA în celulele tumorale (insertul din dreapta jos, × 1.000). ( d ) Un caz HP-pozitiv arată expresia CagA în celulele tumorale ale mucoasei gastrice. ( e ) Caz HP pozitiv arată expresia CagA în celulele tumorale gastrice submucoase (inserție dreapta jos, × 1.000). f ) Dublă colorare: celulele tumorale cu colorare nucleară CagA (colorare maro) sunt, de asemenea, pozitive pentru CD20 (colorare roșie) (inserare în dreapta jos, × 1000).

Imagine la dimensiune completă

Asocierea expresiei CagA cu rezultatul clinic în DLBCL gastric HP-pozitiv "pur". A ) Relația dintre statutul CagA și EFS. b ) Relația stării CagA cu sistemul de operare.

Imagine la dimensiune completă

La pacienții cu HP-pozitiv care au primit regimuri pe bază de rituximab/antraciclină (n = 13), am observat că pacienții care exprimă CagA au avut un EFS și OS mai bun pe 5 ani decât pacienții fără CagA (EFS pe 5 ani, 83,3%) vs. 67,7%, P = 0,052; OS pe 5 ani, 100,0% față de 66,7%, P = 0,0558). În mod similar, la pacienții tratați cu chimioterapie pe bază de antraciclină (n = 25), pacienții care exprimă CagA au avut un EFS și OS mai bun pe 5 ani decât pacienții fără (EFS pe 5 ani, 91,7% față de 40,0%, P = 0,002; 5 ani) . OS, 91,7% vs. 50%, P = 0,005).

discuţie

Am demonstrat că DLBCL gastric "pur" gastric HP-pozitiv are un stadiu clinic mai scăzut, scoruri IPI mai mici, un răspuns mai bun al tumorii la chimioterapie și un EFS și OS excelent pe 5 ani. Aceste descoperiri sugerează că DLBCL gastric asociat cu HP „pur” împărtășește proprietățile clinicopatologice ale limfomului gastric convențional MALT, sugerând o etiologie suprapusă între cele două grupuri de limfoame gastrice.

Cu toate acestea, datorită interacțiunii complexe dintre micromomi și genom/epigenom, concluzia studiului nostru ar trebui confirmată într-o altă cohortă dintr-o populație diversă. De exemplu, studiile epidemiologice indică faptul că incidența limfomului gastric MALT în Asia de Est este mai mare decât în ​​țările occidentale, 22, 23, 24 și majoritatea tulpinilor HP din Asia de Est sunt CagA pozitive. CagA din Asia de Est poartă un segment de acid lutamic-prolină-izoleucină etirozină-alanină (EPIYA) -D care diferă de motivul EPIYA-C Western CagA. 26 Deoarece EPIYA-D prezintă o afinitate mai mare pentru legarea SHP-2 și activitatea tirozinei de fosforilare decât EPIYA-C, 27 limfoamele HP-pozitive din acest studiu pot fi mai strâns legate de calea de semnalizare legată de HP.

Originea celulară a DLBCL gastric pur HP nu este clară. Studiile anterioare de profilare clonală, citogenetică și transcripțională sugerează că unele DLBCL gastrice "pure" pot fi transformate din componente legate de HP ale limfomului MALT. 28, 29, 30, 31, 32 Spre deosebire de conceptul canonic că limfoamele legate de HP sunt de origine a celulelor B în zona marginală, 8, 33, 34, un studiu recent multicentric de fază II (studiu HG-L1) parțial DLBCL dependent de HP "pur" gastric provine din GCB. 35 În acest studiu, am demonstrat că 25 (64%) dintre pacienții cu DLBCL gastrici „puri” cu 39 HP pozitivi aveau imunofenotipul GCB. Aceste constatări cheie au emis ipoteza că HP poate transforma celulele GCB în celule de limfom în anumite DLBCL gastrice "pure" gastrice legate de HP, în special DLBCL "pure" dependente de HP. 35, 36, 37, 38

Pentru a exclude posibilitatea ca bolile localizate să poată fi asociate cu un comportament mai puțin agresiv și DLBCL nodal poate beneficia mai mult de regimurile bazate pe rituximab/antraciclină 39, am arătat că infecția cu HP rămâne un factor de prognostic excelent pentru EFS și OS la pacienții cu boală localizată. (etapa). I-IIE1) și la pacienții care au primit doar chimioterapie convențională pe bază de antraciclină. Chiar și cu aceeași gamă de tratament cu regimuri pe bază de rituximab/antraciclină, pacienții care au avut rezultate pozitive la HP au avut rezultate mai bune decât pacienții care au dat rezultate negative la HP. O tendință similară de EFS și OS mai bune pe 5 ani a fost observată la pacienții localizați cu I-IIE1 HP pozitivi cu stadiu localizat I-IIE1 tratați cu regimuri pe bază de antraciclină și pe bază de rituximab/antraciclină.

Rezultatele noastre sugerează că DLBCL gastric "pur" legat de HP, și în special cele care exprimă CagA în celulele tumorale, sunt asociate cu un comportament tumoral mai puțin agresiv, răspuns crescut la chimioterapie și prognostic mai bun. Originea celulară a acestor limfoame trebuie monitorizată.