abstract

Principalul

Aproximativ 5% din toate cazurile de cancer mamar sunt asociate cu sindroame de predispoziție ereditară și aproximativ jumătate dintre acestea sunt cauzate de mutații ale genelor BRCA1 și BRCA2 (Hopper, 2001). Purtătorii de mutații ale genelor BRCA1 și BRCA2 prezintă un risc de cancer de sân de până la 90% (Rebbeck, 2002) și sunt necesare strategii eficiente de prevenire pentru aceste femei.

Materiale și metode

obiecte

Tabel în dimensiune completă

Implantarea țesutului mamar la șoareci nud atimici

Determinarea imunohistochimică a proliferării și exprimării receptorilor steroizi

Activitatea proliferativă a fost evaluată prin imunohistochimie (IHC) folosind anticorpul monoclonal murin MIB-1 (Coulter Ltd, UK) crescut împotriva antigenului asociat cu proliferarea Ki67. Expresia ERα și PgR a fost determinată de IHC utilizând un anticorp monoclonal anti-ERα de șoarece (clona ID5, Dako Ltd, Marea Britanie) și un anticorp monoclonal anti-PR de șobolan (clona KD68, Abbott Laboratories, Marea Britanie). Metodele și diluțiile antigenului cu microunde au fost descrise mai sus (Clarke și colab., 1997a). Legarea anticorpilor a fost detectată indirect folosind al doilea anticorp biotinilat adecvat, complexul avidină-biotină conjugat cu peroxidază (ABC Elite, Vector Laboratories, UK) și diaminobenzidină ca cromogen. Cuantificarea imunocolorării a fost efectuată la microscopul luminos și limitată la celulele epiteliale ale unităților canalului terminal lololoalveolar. Zonele care vor fi numărate au fost selectate în afara focalizării la o putere redusă, apoi au fost înregistrate câmpuri complete de mare putere. Au fost evaluate cel puțin 1000 de celule epiteliale per probă și numărul de celule marcate a fost exprimat ca procent din numărul total de celule. Intensitatea colorării nu a fost evaluată.

metode statistice

Datele sunt prezentate ca mediane împreună cu intervalele intercuartile respective (IQR). Modificările generale între tratament sau grupurile de risc au fost analizate folosind o analiză a varianței nonparametrică Kruskal-Wallis. Dacă acest lucru s-a dovedit a fi semnificativ la nivelul de 5%, atunci au fost efectuate comparații în perechi folosind testul U nonparametric Mann-Whitney.

Rezultatul

Estradiolul stimulează activitatea proliferativă a celulelor epiteliale mamare în toate grupurile de risc

Activitatea proliferativă a epiteliului mamar normal luată de la femeile cu risc de cancer mamar ( A ) la femeile cu risc ridicat ( B ) Toți purtătorii mutației BRCA1 sau BRCA2 ( C ) și purtători de mutație BRCA1 ( D ), care au fost implantate la șoareci nud atimici înainte (ziua 0) și după o săptămână de tratament cu peleți martor 0,5 mg E2 sau 2,0 mg E2. Liniile orizontale îngroșate indică valori mediane, precum și imagini deasupra coloanelor care indică IQR. Numerele din paranteze sunt numărul de eșantioane disponibile pentru analiză în fiecare grup, iar valorile P indică semnificația diferențelor dintre grupurile de tratament prin analiza neparametrică a varianței Kruskal-Wallis. Ctrl = control.

Imagine la dimensiune completă

Inducerea expresiei receptorului de progesteron de către estradiol este afectată în țesutul mamar de la purtătorii mutației BRCA

Nu s-au observat diferențe semnificative în nivelurile de expresie ERa și PgR ale celulelor epiteliale mamare între grupurile de risc în momentul în care țesutul a fost recoltat de la femei (Tabelul 2). Cu toate acestea, la 14 zile după implantare, șoarecii netratați au prezentat o scădere semnificativă a procentului de celule PgR-pozitive în toate grupurile de risc (Tabelul 3). Acest lucru a fost cel mai pronunțat în probele de țesut de la femei cu mutații BRCA1 și, ca rezultat, procentul de celule PgR-pozitive a fost de aproximativ patru ori mai mic decât în ​​grupul cu risc populațional (P

estrogeni

Expresia receptorului de progesteron în epiteliul mamar normal preluat de la femeile cu risc populațional de cancer mamar, pacienții cu risc crescut și cei care au mutații BRCA1 și BRCA2 implantate la șoareci nudiți atimici și tratați timp de 1 săptămână cu control, ( A ), 0, 5 E2 ( B ) sau 2,0 mg E2 ( C ) -peleți silicatici. Liniile orizontale îngroșate indică valori mediane, precum și imagini deasupra coloanelor care indică IQR. Numerele dintre paranteze sunt numărul de eșantioane disponibile pentru analiză în fiecare grup, iar valorile P indică semnificația diferențelor dintre grupurile de risc prin analiza neparametrică a varianței Kruskal-Wallis. Receptor PgR = progesteron; PR = riscul populației; HR = risc ridicat; All muts = toate mutațiile; Numai BRCA1 = numai purtători de mutație BRCA1 .

Imagine la dimensiune completă

Efectele peletei E2 cu doză mare asupra expresiei PgR în epiteliul mamar uman în toate momentele după începerea tratamentului sunt prezentate în Figura 3. În probele de țesut din grupul cu risc populațional, expresia PgR a fost maximă după o săptămână. Tratamentul cu o doză mare de peletă E2 și acest nivel a fost menținut pentru restul perioadei experimentale. În schimb, răspunsul în grupul tuturor mutațiilor a fost atenuat astfel încât procentul de celule PgR-pozitive din probele din acest grup a fost semnificativ mai mic decât în ​​populația grupului de risc nu numai înainte de începerea tratamentului, ci și după 2 săptămâni după tratament (P

Efectele tratamentului E2 în timp asupra expresiei receptorilor de progesteron în epiteliul mamar la femeile cu risc populațional de cancer mamar (♦) comparativ cu femeile cu risc crescut (▪) și persoanele cu mutații BRCA1 și BRCA2 (▴). Valorile mediane sunt reprezentate de simboluri solide, în timp ce barele de erori indică IQR, iar numerele dintre paranteze sunt probe disponibile pentru analiză în fiecare grup. * P ** P *** P 1 zi-1 a redus expresia Ki67 în aceste trei grupuri de risc comparativ cu 0,5 mg de E2 singur (P -1 săptămână -1) în riscul populației, crescut = risc și grupuri ale tuturor mutațiilor în comparație până la 0,5 mg de E2 singur (Figura 4A, B și C, P

Activitate proliferativă epitelială a sânului normal prelevată de la femeile cu risc populațional de cancer de sân ( A ), oameni cu risc ridicat B ), pacienți cu mutații BRCA1 și BRCA2 ( C ) și purtători de mutație BRCA1 ( D ) după implantare în ochiul liber atimic al șoarecilor și tratament cu 0,5 mg E2 timp de 1 săptămână, urmat de 2 săptămâni de E2 în combinație cu TAM sau fulvestrant. Liniile orizontale îndrăznețe indică mediane, precum și numere în partea de sus a coloanelor, indicând IQR. Numerele dintre paranteze sunt numărul de probe disponibile pentru analiză în fiecare grup de tratament, iar valorile P indică semnificația diferențelor dintre grupurile de tratament prin analiza neparametrică a varianței Kruskal-Wallis. Ctrl = control; 0,5 mg E2 = tratament cu granule de silicat E2 0,5 mg; TAM = tamoxifen (1 mg șoarece-1 zi-1); FUL = fulvestrant (șoareci de 5 mg −1 săptămână −1).

Imagine la dimensiune completă

A fost examinată, de asemenea, capacitatea TAM și fulvestrant de a inversa efectele tratamentului cu doză mare (2 mg) E2 asupra expresiei Ki67 a celulelor epiteliale mamare (date neprezentate). Ambii antiestrogeni ar putea reduce efectele E2 asupra proliferării în toate grupurile de risc, dar efectele lor au fost destul de variabile, deoarece nivelurile serice ale medicamentului obținute cu regimurile de dozare de mai sus nu au fost suficiente pentru a depăși nivelurile plasmatice ridicate de E2 obținute după tratamentul cu 2 mg de Peletă E2.

discuţie

Pe scurt, am arătat că proliferarea epitelială a sânului stimulată de E2 recoltată de la femeile care au mutații heterozigote în genele BRCA1 și BRCA2 poate fi inversată atât de SERM (TAM), cât și de antiestrogen (fulvestrant), care nu are efecte agoniste. că expresia PgR modificată este fenotip asociat cu mutații în genele BRCA1 și BRCA2. Concluzionăm că tratamentul antiestrogen precoce ar trebui să fie eficient în prevenirea cancerului de sân la femeile cu risc crescut.

Mulțumiri

Acest studiu a fost finantat de Research Endowment Fund de la Christie Hospital si AstraZeneca Pharmaceuticals. Multumesc Dr. Alan Wakell de la Astrazeneca pentru furnizarea fulvestrantului utilizat în acest studiu și Dr. John Coyne (South Manchester University Hospital Hospital) pentru asistența sa la examinarea histologică a probelor utilizate.