relația

  • abstract
  • scopul:
  • proiecta:
  • subiecte:
  • dimensiuni:
  • rezultatele:
  • concluzie:
  • introducere
  • metode
  • obiecte
  • măsurare
  • Agregarea trombocitelor dependentă de leptină
  • Abordare analitică
  • Rezultatul
  • discuţie

abstract

Pentru a verifica dacă răspunsul plachetelor la leptină este asociat cu factori de risc ai sindromului metabolic.

proiecta:

subiecte:

Am studiat 169 de pacienți consecutivi, vârsta medie = 43, 6 ± 9, 9 ani, supraponderal (N = 57) sau obezitate (N = 112).

dimensiuni:

Analiza cluster a fost utilizată pentru a genera trei clustere bazate pe sensibilitatea trombocitelor la creșterea dozelor de leptină. Profilurile factorilor de risc ale sindromului metabolic cu trei grupuri au fost comparate prin analize discriminante.

rezultatele:

Sensibilitatea trombocitelor la leptină a fost absentă în grupul 1, în timp ce grupul 3 a avut cel mai mare răspuns la agregarea trombocitelor pentru preincubarea leptinei. Nivelurile de leptină plasmatică au fost reduse semnificativ de la grupul 1 la grupul 3 la ambele sexe. Pacienții din grupul 2 au avut un profil moderat de sensibilitate la leptină. Cele mai mari valori ale indicelui de masă corporală (IMC) au fost mai frecvente la persoanele care nu au răspuns, în timp ce prevalența circumferinței taliei înalte, precum și a hipertrigliceridemiei și a hipertensiunii arteriale a crescut odată cu creșterea răspunsului la leptină de la grupul 1 la grupul 3. Sindromul metabolic factor de risc ca grup specific în 69,0% din grupul 1, 54,9% din grupul 2 și 55,8% din grupul 3. Leptina circulantă, circumferința taliei, trigliceridele plasmatice și IMC au definit modele caracteristice ale factorilor de risc ai sindromului metabolic în grupuri.

concluzie:

La pacienții ambulatori cu supraponderalitate și obezitate, factorii de risc pentru sindromul metabolic sunt într-o oarecare măsură paraleli cu răspunsul plachetelor la leptină. Astfel de corelații includ nivelurile plasmatice de leptină, circumferința taliei, trigliceridele plasmatice și IMC și pot contribui la un risc excesiv de evenimente cardiovasculare la pacienții supraponderali și obezi.

Se știe că obezitatea este asociată cu aterotromboza accelerată și cu o incidență crescută a morbidității și mortalității cardiovasculare. Mai multe dovezi demonstrează că tulburările metabolice care însoțesc adesea supraponderalitatea, cum ar fi rezistența la insulină, hipertensiunea arterială, hipertrigliceridemia și colesterolul cu lipoproteine ​​cu densitate ridicată (HDL), promovează progresia aterosclerozei la pacienții obezi. 1, 2, 3 Modificarea echilibrului hemostatic poate contribui, de asemenea, la un risc excesiv de evenimente cardiovasculare acute la persoanele obeze. 4, 5

Leptina, un produs al genei ob 6, este o proteină secretată în principal de țesutul adipos care semnalizează mărimea depozitelor de energie către sistemul nervos central prin modularea activității centrelor hipotalamice implicate în reglarea aportului alimentar și a echilibrului energetic. 7 Deși leptina pare să joace un rol major în reglarea greutății corporale și a metabolismului energetic, unele dovezi sugerează că acest hormon ar putea fi implicat în alte mecanisme fiziopatologice, cum ar fi funcția imunitară, angiogeneza, formarea oaselor și fertilitatea și expresia receptorilor de leptină. a fost demonstrat în diferite țesuturi. 8, 9, 10, 11, 12, 13

Sindromul metabolic este o constelație de factori de risc interconectați care par să susțină în mod direct dezvoltarea bolilor cardiovasculare aterosclerotice. 22, 23 Sindromul metabolic este, de asemenea, asociat cu o stare hipercoagulabilă, care constă în niveluri crescute de factori de coagulare (factor tisular, factor VII și fibrinogen), precum și inhibarea căii fibrinolitice (inhibitor crescut al activatorului plasminogen-1 și scăderea plasminogenului tisular activator activator). În plus, asocierea sindromului metabolic cu disfuncția endotelială și dislipidemia induce agregarea trombocitelor, crescând în continuare riscul de evenimente trombotice. 24 Studiul relației dintre răspunsul trombocitelor la leptină și sindromul metabolic este, prin urmare, de un interes deosebit.

În acest studiu, am testat ipoteza că sensibilitatea trombocitelor la leptină este asociată cu variabile ale sindromului metabolic pentru a verifica dacă respondenții sunt caracterizați de un fenotip tipic clinic/metabolic cu risc ridicat.

metode

obiecte

Seria noastră a constat din 169 de pacienți cu consimțământul informat asupra supraponderabilității sau obezității, care au fost admiși treptat la ambulatoriu pentru prevenirea și tratamentul obezității la Spitalul Universitar din Messina, Italia. Subiecții care au primit tratament cu agenți antitrombotici (inclusiv aspirină), contraceptive sau terapie de substituție hormonală au fost excluși din studiu. Criteriile de diagnostic pentru sindromul metabolic au fost cele propuse de US National Cholesterol Education Program - Adult Treatment Panel III (NCEP ATP-III): circumferința taliei este de 102 cm pentru bărbați sau de 88 cm pentru femei; trigliceride plasmatice -150 mg/dl; Colesterolul HDL 23 Protocolul de studiu a fost aprobat de comitetul local de etică.

măsurare

Înălțimea corpului a fost măsurată fără pantofi la cel mai apropiat 0,5 cm; greutatea corporală a fost măsurată fără îmbrăcăminte la cel mai apropiat 0,1 kg; indicele de masă corporală (IMC) a fost calculat ca greutate/înălțime 2 (kg/m2). Circumferința benzii a fost măsurată la jumătatea distanței dintre marginea inferioară a coastelor și creasta lombară. Tensiunea arterială a fost măsurată cu ajutorul unui tensiometru Riva-Rocci (Zenith, Roma, Italia). Valorile tensiunii arteriale au fost colectate de la pacienții în repaus în decubit dorsal timp de cel puțin 5 minute. Prima măsurare a fost exclusă și s-a luat în calcul media următoarelor trei măsurători efectuate la intervale de 3 minute. Glucoza plasmatică în jeun (AutoAnalyzer, Beckman, Milano, Italia), colesterolul HDL, trigliceridele (procedura CHOP-PAP, Boehringer Biochemia, Milano, Italia) și leptina (trusa umană Leptin RIA, Linco Research Inc., St. Charles, MO, SUA )). au fost măsurate pentru fiecare pacient înscris.

De asemenea, au fost colectate informații despre starea hormonală a femeilor (post-/premenopauză). Analiza a luat în considerare obiceiurile de fumat și utilizarea medicamentelor antihipertensive, hipoglicemiante și/sau de scădere a grăsimilor în luna dinaintea înscrierii în studiu.

Agregarea trombocitelor dependentă de leptină

Răspunsul la agregarea trombocitelor la leptină a fost măsurat așa cum s-a descris mai sus. 19, 20 Pe scurt, după un post peste noapte, a fost obținută o probă de sânge venos de la fiecare pacient în poziție culcat din vena cubică a umărului folosind o canulă plasată cu 30 de minute înainte de recoltare pentru a evita stresul de injecție și menținută prin infuzie lentă de soluție salină (0,5 ml/min). Probele de sânge (25 ml) au fost prelevate într-un tub conic de polipropilenă conținând 3,33 ml/l acid citric/citrat de sodiu/dextroză (ACD) (format din 64 mmol/l acid citric, 85 mmol/l citrat de sodiu și 111 mmol/l dextroză ).

Plasma bogată în trombocite (PRP) a fost obținută prin centrifugare la 800 g timp de 20 de minute la 4 ° C. PRP a fost centrifugată la 2000 g la 4 ° C pentru a forma pelete moi de trombocite resuspendate în N-2-hidroxietilpiperazină-N '-2 - acid etansulfonic și hidroxid de potasiu (HEPES) Tampon Tyrod (soluție salină tamponată HEPES (HBS)). constând din 145 mmol/l NaCl, 5 mmol/l KCl, 0,5 mmol/l NaH 2 PO 4, 1 mmol/l MgSO 4, 5,5 mmol/l glucoză, 3,0 mg/l albumină serică bovină, 10 mmol/l HEPES, pH 7, 4 și spălat o dată. Centrifugarea a fost efectuată la 4 ° C pentru a minimiza activarea spontană a trombocitelor. 25

Plăcile au fost numărate (Coulter International Corporation, Miami, FL, SUA) și resuspendate în tampon HBS la o concentrație de 0,5 - 1 x 108 plăci/ml. Alicote (0,4 ml) conținând 1 mmol/L CaCI2 au fost distribuite în cuve de agregometru. O alicotă de HBS a fost utilizată ca referință pentru a indica 100% în experimentele de agregare optică. Răspunsul la agregare la agonist a fost monitorizat optic (PACKS4, Helena Laboratories, Beaumont, TE, SUA). Transmitanța luminii a fost comparată continuu cu transmitanța luminii de la HBS. Agregarea plachetară a fost exprimată ca% din agregarea maximă.

Pentru a studia efectele leptinei asupra agregării induse de agonist, 0,4 ml din suspensia de trombocite au fost preincubate cu leptină 5, 10, 25, 50 sau 100 ng/ml (Linco Research Inc., St. Charles, MO, SUA) timp de 5 minute, apoi stimulat adenozin difosfat (ADP) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, SUA) 2 μmol/L (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, SUA).

Abordare analitică

Pacienții au fost agregați în trei clustere prin analiza K-cluster cluster pe baza răspunsului lor de agregare% maxim la ADP de 2 μmol/l după preincubare cu doze crescute de leptină. Datorită distribuției înclinate a% agregării maxime, datele au fost transformate cu sigla. Analiza clusterului face posibilă gruparea pacienților în grupuri care au un profil marcat de agregare a trombocitelor ca răspuns la creșterea dozelor de leptină. Distanțele pătrate euclidiene au fost calculate pentru a evalua diferența sau distanța dintre pacienți în spațiul multidimensional definit de% agregare maximă. Cu cât distanța este mai mică, cu atât este mai mare afinitatea dintre pacienți, adică între profilurile lor de agregare a trombocitelor.

Modelul a fost forțat să formeze trei clustere, deoarece singurul studiu care a comparat respondenții și pacienții care nu au răspuns a fost efectuat cu plăci de la donatori săraci. 21 Orice definiție a priori a modelelor de răspuns trombocitar de la donatorii obezi pe baza cunoștințelor disponibile ne poate limita înțelegerea relației dintre răspunsul trombocitelor la leptină și factorii de risc ai sindromului metabolic. Am raportat anterior că supraponderalitatea și obezitatea sunt asociate cu o scădere treptată progresivă a sensibilității trombocitelor la leptină. Prin urmare, am ajuns la concluzia că forțarea modelului să formeze trei clustere ar putea fi o strategie bună conform ipotezei că va exista un nivel mediu de sensibilitate a trombocitelor între cei care nu răspund și cei care răspund.

Rezultatul

Pacienții înscriși în studiu au avut o vârstă medie de 43,6 ± 9,9 ani. Majoritatea pacienților erau de sex feminin (66,9%) și 112 din 169 de pacienți aveau un IMC mai mare sau egal cu 30 kg/m2. Cei mai frecvent observați factori de risc pentru sindromul metabolic au fost colesterolul HDL scăzut (47,9%) și circumferința taliei ridicate (46,7%), urmată de hipertensiune arterială (38,5%), hipertrigliceridemie (35,5%) și hiperglicemie (33, 5%). 7%). Starea postmenopauză a fost prezentă la 37,2% dintre femeile înscrise.

Răspunsul de agregare% maxim la preincubare cu creșterea dozelor de leptină în cele trei grupuri identificate este prezentat în Tabelul 1. Plăcile de la pacienții din grupul 1 (care nu răspund) nu au avut răspuns la preincubarea leptinei și% agregarea maximă a fost similară cu ADP 2 μmol/l singur . (procentul transformat în jurnal al agregării maxime = 0,4 ± 0,3). În schimb, trombocitele de la pacienții din grupul 3 (foarte receptivi) au avut o sensibilitate foarte mare la leptină, care a început la o concentrație de 10 ng/ml cu o relație clară doză-răspuns. Clusterul 2 (moderat receptiv) a avut un profil de agregare trombocitară dependentă de leptină între grupurile din grupurile 1 și 3. Concentrațiile plasmatice de leptină au fost mai mari la persoanele care nu au răspuns, comparativ cu persoanele care au răspuns moderat și înalt, iar sexul nu a afectat aceste rezultate. (Linia 1).

Tabel în dimensiune completă

Nivelurile de leptină plasmatică în trei grupuri.

Imagine la dimensiune completă

Vârsta, sexul, obiceiurile de fumat și starea postmenopauză nu au făcut distincție între cele trei grupuri. Pacienții supraponderali (IMC = 25-29, 9 kg/m 2) au fost mai frecvenți la pacienții cu o rată ridicată de răspuns, în timp ce persoanele foarte obeze (IMC = 35 kg/m 2 sau mai mult) au fost mai frecvente la pacienții fără răspuns. În schimb, prevalența lățimii de bandă ridicate a crescut odată cu creșterea răspunsului la leptină de la grupul 1 la grupul 3. Tigliceridele plasmatice ridicate, colesterolul HDL și tensiunea arterială au fost mai frecvente la pacienții cu răspunsuri moderate și ridicate comparativ cu cei care nu au răspuns. Glucoza plasmatică nu a fost asociată în mod semnificativ cu gradul de sensibilitate a trombocitelor la leptină, precum și cu utilizarea medicamentelor antihipertensive, hipoglicemiante și lipidice (Tabelul 2).

Tabel în dimensiune completă

Analiza discriminantă a identificat două funcții discriminante, dintre care prima a fost foarte semnificativă (Tabelul 3). În grupul 1, a existat un acord ridicat între calitatea reală și presupusa aderare la cluster (care nu răspunde). Acordul a fost corect pentru grupurile 2 și 3 (mediu și extrem de receptiv): 10,9% dintre pacienții din grupurile 2 și 21, 5% dintre pacienții din grupul 3 au fost clasificați ca aparținând funcțional grupului 1 (Tabelul 4). Matricea de corelație comună din cadrul grupurilor a arătat că coeficientul pentru relația dintre IMC și circumferința taliei a fost de 0,20 Coeficientul Kappa a fost de 0,41, ceea ce corespunde unui acord general echitabil până la moderat între apartenența reală la grupul presupus. Când am exclus IMC și circumferința taliei din modelul discriminant, doar 44,4% din cazuri au fost clasificate corect. Valorile corespunzătoare obținute prin includerea IMC singur, circumferința taliei singure sau ambele variabile au fost 52, 6, 53, 8 și 60,0%.

Tabel în dimensiune completă

Tabel în dimensiune completă

Coeficientul extrem de semnificativ al casetei M a arătat că riscul de clasificare greșită de către funcția discriminantă a fost foarte scăzut, adică definiția profilurilor individuale de răspuns plachetar la leptină a fost foarte fiabilă. Dintre variabilele luate în considerare în analiză, concentrațiile plasmatice de leptină, circumferința benzii, trigliceridele plasmatice și IMC au contribuit semnificativ la funcția discriminantă (Tabelul 5). Când IMC a fost exclus din analiză, coeficientul de circumferință a benzii a fost ușor crescut de la 0,427 la 0,499. să funcționeze.1 sau 2.

Tabel în dimensiune completă

discuţie

Noua descoperire a acestui studiu este dovada că pacienții supraponderali sau obezi pot fi grupați pe baza gradului lor de reacție la trombocite la leptină și că factorii de risc pentru sindromul metabolic pot contribui la definirea profilului clinic al respondenților.

Atât trombocitele sensibile, cât și cele care nu răspund de la donatorii sănătoși exprimă doar forma lungă de semnalizare a ObRb, în ​​timp ce niciuna nu exprimă forma scurtă de nesemnalizare. Scăderea expresiei ObRb pe membrana trombocitară și/sau variantele cu afinitate scăzută a ObRb ar putea fi folosită pentru a explica non-reactivitatea leptinei. 21 Rezultatele noastre extind rezultatele raportate în raportul lui Giandomenico și colab. 21 prin demonstrarea existenței a trei grupuri de pacienți supraponderali sau obezi cu grade diferite de sensibilitate a trombocitelor la leptină. În plus, leptina circulantă și factorii de risc metabolici selectați pot distinge grupurile, adică contribuie la definirea unor modele clinice semnificative asociate cu răspunsul trombocitelor la leptină.

Creșterea circumferinței taliei este puternic asociată cu sensibilitatea scăzută la insulină28, iar adipozitatea abdominală este unul dintre cei mai importanți factori de risc pentru sindromul metabolic. 22, 28, 29, 30 În condiții fiziologice, se știe că insulina reduce agregarea trombocitelor prin reducerea răspunsurilor trombocitelor la ADP și trombină. 31, 32 de trombocite de la pacienții cu rezistență la insulină au o sensibilitate redusă la efectele antiplachetare ale insulinei, 33 și se poate presupune că o rezistență mai mare la insulină la pacienții cu adipozitate abdominală mai pronunțată poate contribui la profilul de sensibilitate a trombocitelor la leptină la pacienții noștri. studiu.

Dislipidemia poate contribui și la creșterea activării trombocitelor. S-a demonstrat că trigliceridele plasmatice cresc agregarea plachetară și incidența tromboembolismului venos, în timp ce aceste efecte adverse sunt inversate de colesterolul HDL. Deoarece sindromul metabolic se caracterizează printr-un dezechilibru al lipoproteinelor cu densitate scăzută oxidată crescută (LDL) și scăderea nivelului de colesterol HDL, este posibil să conducă la hiperagregare. O altă caracteristică a dislipidemiei în sindromul metabolic este o creștere semnificativă a nivelurilor de lipoproteine ​​cu densitate foarte mică (VLDL), care s-au dovedit a induce producția de tromboxan A2 plachetară prin legarea ligandului CD36. Ligandul CD36 facilitează livrarea acizilor grași pentru a produce tromboxani plachetari, care stimulează agregarea plachetară indusă de colagen. 38

Rezultatele noastre nu demonstrează că agregarea plachetară dependentă de leptină este asociată cauzal cu factori de risc pentru sindromul metabolic. Într-adevăr, atât răspunsul trombocitelor la leptină, cât și sindromul metabolic ar putea avea efecte diferite ale aceleiași stări de boală, adică rezistența la insulină. Cu toate acestea, este posibil ca coexistența sensibilității la leptină și a factorilor de risc metabolici selectați să raporteze un profil de risc ridicat bine definit la populația supraponderală sau obeză la pacienții ambulatori și ar trebui efectuate studii suplimentare pentru a clarifica semnificația prognostică a unei astfel de asocieri.,

Studiul nostru are, de asemenea, unele limitări. Concentrațiile plasmatice ale insulinei nu au fost măsurate. Prin urmare, nu este posibil să estimăm cu exactitate gradul de rezistență la insulină și contribuția sa la rezultatele noastre. Cu toate acestea, factori de risc selectați pentru sindromul metabolic, precum circumferința taliei și trigliceridele, sunt puternic asociați cu sensibilitate redusă la insulină. 28 Mai mult, după cum arată rezultatele analizei univariate, relația dintre clustere și anumiți factori de risc pentru sindromul metabolic, precum circumferința taliei și colesterolul HDL, poate fi neliniară. Această problemă ar fi putut reduce capacitatea discriminatorie a acestor variabile în studiul nostru. În cele din urmă, proiectarea secțiunii transversale nu face posibilă verificarea dacă agregarea plachetară dependentă de leptină crește odată cu pierderea în greutate, sensibilitatea îmbunătățită la leptină și nivelurile reduse de leptină. Deși privarea calorică determină răspunsuri hemostatice mai mari la leptină la persoanele cu greutate normală 39, această constatare ar trebui să fie reprodusă prospectiv la pacienții supraponderali și obezi.

În concluzie, studiul nostru arată că capacitatea agregării plachetare la leptină și sindromul metabolic sunt strâns legate. Studiul nostru oferă un sprijin suplimentar pentru ipoteza că interacțiunea directă a adipocitelor cu trombocite poate contribui la un risc excesiv de evenimente cardiovasculare la pacienții supraponderali și obezi. Pe baza studiilor noastre și a studiilor anterioare, pare rezonabil să verificăm dacă modelul caracteristic al răspunsului la agregarea trombocitelor la leptină caracterizează pacienții cu risc deosebit de mare de complicații cardiovasculare.