distribuția

  • obiecte
  • abstract
  • introducere
  • Materiale și metode
  • Sursa și manipularea țesuturilor
  • imunohistochimie
  • Sursa anticorpului
  • Rezultatul
  • Imunolocalizarea PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS și vimentină în clitorisul uman
  • discuţie

obiecte

  • Semnalizare celulară
  • izoenzime
  • muşchi
  • Biologia reproducerii

abstract

Materiale și metode

Sursa și manipularea țesuturilor

În conformitate cu reglementările comitetului local de etică al Facultății de Medicină din Hanovra, țesutul clitoral de la mijloc la partea proximală a fost obținut în decurs de 4-6 ore după moartea a patru femei decedate (cu vârsta cuprinsă între 18 și 42 de ani). Subiecții nu aveau antecedente cunoscute de boli legate de disfuncția sexuală. După excizie, probele de țesut au fost plasate imediat într-o soluție rece cu gheață de 4% formaldehidă în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS; pH 7,4).

imunohistochimie

Probele de țesut clitorian au fost fixate prin imersiune timp de 4 ore într-o soluție răcită cu gheață de 4% formaldehidă în PBS (pH 7,4) și clătite de trei ori timp de 24 de ore cu PBS răcit cu gheață conținând 15% zaharoză. Probele au fost plasate în Tissue-Tec (Miles Laboratories, Elkhart, IN, SUA) și apoi congelate rapid în izopentan la -40 ° C. Țesutul a fost tăiat în felii groase de 8-10 μm și decongelat pe lamele de sticlă. Secțiunile au fost incubate timp de 2 ore în PBS suplimentat cu 0,2% Triton X-100 și 1% albumină serică bovină, urmată de incubare timp de 24 de ore (la temperatura camerei) cu anticorpi primari (anti-eNOS, -sm α-actină). PDE2, -PDE5, -cGK și -vimentin) în diluarea corectă (anti-α-actină: 1: 400, anti-eNOS: 1: 1000, anti-PDE2/PDE5: 1: 250, anti-cGK: 1: 250, anti-vimentină: 1:40). După clătirea secțiunilor cu PBS, s-au aplicat fie izotiocianat de fluoresceină, fie anticorpi secundari marcați cu roșu Texas (diluții 1:80 și 1: 160) și secțiunile au fost incubate timp de 2 ore. Secțiunile au fost apoi combinate cu fenilendiamină. Vizualizarea a fost începută cu un microscop laser (Olympus, Tokyo, Japonia) și imagistica a fost efectuată folosind ViewFinder Lite (versiunea 2.0, Pixera, Egham, Marea Britanie).

Sursa anticorpului

Anticorpii îndreptați împotriva PDE2A, PDE5A și PDE11A au fost achiziționați de la FabGennix (Frisco, TX, SUA), anti-cGKI AB provine din Calbiochem (La Jolla, CA, SUA), actina α-musculară netedă, -vimentină și - anticorpii eNOS provin din Sigma BioSciences (St. Louis, MO, SUA). F (ab) 2 fragmente conjugate cu Texas Red și Fluorescein au fost obținute de la Jackson Immunoresearch Laboratories (West Grove, PA, SUA).

Rezultatul

Imunolocalizarea PDE2, PDE5, PDE11, cGKI, eNOS și vimentină în clitorisul uman

( A - f ) Microscopie cu fluorescență laser: expresie a fosfodiesterazei (PDE) 2 de legare a guanozin monofosfatului ciclic (GMP) 2 (PDE) adenozin monofosfat ciclic (AMP), stimulată de GMP ciclic; A ), fosfodiesterază (PDE) 5 (GMP ciclic) PDE; b ) colorat versus actina musculară α netedă ( c ), protein kinaza de tip I (cGKI, protein kinaza ciclică de legare a GMP; d ) și oxid de azot endotelial sintază (eNOS; e ) în vase mici care împrăștie spațiul subepitelial și corpul cavernos al clitorisului (mărire × 40). f ) Micografie de secțiune a țesutului clitorian reprezentând imunomarcarea pentru PDE11A (substrat dublu PDE) într-un trunchi nervos situat în stromă (mărire × 100). Inserții în litere b ), d ), f ): colorarea de control omițând anticorpii primari (mărire × 40).

Imagine la dimensiune completă

( A - c ) Celule similare cu așa-numitele celulele interstițiale (IC) care prezintă imunosemnalele specifice pentru guanozin monofosfat ciclic (GMP) care leagă fosfodiesteraza (PDE) 2 (adenozin monofosfat ciclic (AMP) PDE) în epiteliul bazal al clitorisului uman. Mărire: × 10 ( A ), × 20 ( b ), × 100 ( c ). b ) Imagine suflată a zonei încadrate prezentată în scrisoare A ), c ) imagine suflată a zonei încadrate prezentată în scrisoare b ). Lipiți în ( b ): culoare de control (mărire × 40).

Imagine la dimensiune completă

A - c ) Detalii din epiteliul bazal al clitorisului uman: celule asemănătoare celulelor interstițiale (IC) care prezintă imunocolorații bogate în fosfodiesterază (PDE) în corpurile și fibrele lor celulare. A ), × 100 ( b ). b ) Imagine suflantă a unei celule de tip IC prezentată în A ). Expresia vimentinei ( c ) în celulă să fie IC în stratul subepidermic (mărire × 100). Lipiți în c ): culoare de control (mărire × 40).

Imagine la dimensiune completă

Tabel în dimensiune completă

discuţie

Deși se crede că clitorisul este asociat cu dezvoltarea normală a ciclului feminin de excitare sexuală și fază orgasmică, foarte puține studii au examinat fiziologia acestui organ genital. 5, 6, 7 Pe baza acestor constatări, a fost sugerat rolul sistemului NO/ciclic GMP în procesul excitării sexuale a femeilor. Rolul central al AMP ciclic și al izoenzimelor ciclice GMP și PDE în controlul diferitelor funcții tisulare a fost stabilit și conceptul farmacologic de creștere a nivelurilor de nucleotide ciclice în țesut, de exemplu cu inhibitori selectivi PDE, pentru tratamentul bolilor Tractul urogenital), incontinență urinară, simptome ale așa-numitelor sindrom prostatic benign, incluzând simptome ale tractului urinar inferior și obstrucție la ieșirea vezicii urinare. 18, 19, 20 Pe baza ipotezei că răspunsul la stimularea sexuală la femei este mediat parțial de aceleași căi biologice ca la bărbați, s-a luat în considerare dacă utilizarea inhibitorilor PDE ar putea facilita și organele genitale ale femeilor. relaxare musculară netedă, ducând la îmbunătățirea excitării subnormale. 21

În cele din urmă, rezultatele susțin rolul semnalizării ciclice a GMP și a proteinelor ciclice conexe care leagă cGMP, cum ar fi PDE2, PDE5 și cGKI, în controlul fluxului clitorian. În plus, se pare că PDE2 și PDE11 sunt implicate și în mecanismul de transmisie locală (neuro) în clitoris.