adecvate

  • abstract
  • Principalul
  • MATERIALE ȘI METODE
  • Animalele și protocolul de studiu.
  • Probiotice.
  • Strave.
  • Creșterea și creșterea în greutate.
  • Glucoza plasmatică, insulina, aminoacizii, ureea și cortizolul.
  • Analiza perfuziei și aminoacizilor.
  • Analiza factorilor de inițiere a traducerii și a proteinelor ubiquitinate totale.
  • analize statistice.
  • REZULTATELE
  • Creșterea în greutate și creșterea.
  • Glucoza plasmatică, insulina, cortizolul, aminoacizii și transformarea proteinelor din întregul corp.
  • Sinteza proteinelor musculare scheletice, factorii de inițiere a traducerii și proteinele ubiquitinate.
  • Corelațiile leucinelor plasmatice.
  • DISCUŢIE
  • glosar

abstract

Principalul

Pot fi utilizate diferite mijloace pentru a preveni pierderea în greutate, inclusiv medicamente anabolice și/sau nutriție enterală (11). Scopul acestor strategii este menținerea unei stări anabolice prin stimularea PS și minimizarea proteolizei. Dintr-o perspectivă a mușchilor scheletici, aceste abordări stimulează inițierea traducerii proteinelor prin mTOR, reduc activitatea proteolitică (în special proteoliza mediată de ubiquitină) sau ambele. Acest efect celular s-ar traduce apoi printr-o creștere a ratei sintezei fracționare a mușchilor scheletici (FSR) și menținerea creșterii normale și a masei musculare.

Nutriția enterală ar putea fi eficientă în prevenirea risipei musculare și restricționarea creșterii IBD prin creșterea semnalelor celulare mediate de insulină care inițiază PS sau prin creșterea directă a disponibilității nutrienților. Efectele anabolice ale aminoacizilor plasmatici crescuți, în special leucina, sunt bine cunoscute și au fost demonstrate atât la purcei sănătoși (12, 13), cât și la purcei „septici” (14). Un studiu clinic recent a arătat că hiperinsulinemia și remisiunea bolii la adulții cu boala Crohn sau colită ulcerativă sunt corelate (15). Prin urmare, în ciuda deficitului energetic, este posibil să se mențină creșterea și PS cu o cantitate constantă de nutrienți.

Am arătat anterior în aceleași purcei folosiți în acest studiu că suplimentarea probiotică a crescut PS în sinteza ficatului și a albuminei, dar nu a afectat severitatea bolii sau PS doar în colon (16). Pe baza unei descoperiri neașteptate a ficatului stimulat de PS, ne-am concentrat asupra examinării dacă probioticele ar provoca un efect anabolic similar în mușchiul scheletic pentru a atenua risipa musculară asociată cu aportul redus de alimente și inflamația în IBD. Alții au arătat că suplimentarea cu probiotice este o potențială terapie adjuvantă pentru IBD atât la IBD adulți, cât și la copii (17-19). Cu toate acestea, majoritatea studiilor clinice de probiotice s-au concentrat pe controlul simptomelor și inducerea remisiunii, dar nu pe starea nutrițională.

Prin urmare, acest studiu a examinat efectul aportului alimentar enteral susținut cu un aport adecvat de macronutrienți, 50% cerință de macronutrienți sau 50% cerință de suplimente probiotice pentru colita acută. Am folosit o abordare constantă de hrănire pentru a crește concentrația de insulină și aminoacizi. Stimularea susținută a semnalizării celulare mediate de insulină și leucină este de așteptat să stimuleze procesele celulare anabolice pure. Prin urmare, ipotezele noastre au fost că 1) menținerea unui aport adecvat de nutrienți ar preveni afectarea creșterii și menținerea nivelului de mușchi PS și 2) administrarea de probiotice nu ar reduce scăderea creșterii musculare și a PS ca răspuns la restricția alimentară în modelul colitei purcelușilor.

MATERIALE ȘI METODE

Animalele și protocolul de studiu.

Probiotice.

Porcii C-MRP au primit 450 x 109 CFU VSL # 3 (VSL Pharmaceuticals, Gaithersburg, MD) ca 1 pachet/zi în 30 ml dietă, 15 ml de două ori pe zi). Doza s-a bazat pe studii de rozătoare și la om, în care greutatea corporală (0, 73) a fost utilizată pentru a se scala între dimensiunile metabolice ale corpului (22-24).

Strave.

În laboratorul nostru, au fost formulate diete pe bază de albumină de ou și proteine ​​din zer, după cum sa menționat deja (16). Dietele au fost perfuzate zilnic timp de 16 ore (Compat Feeding Pump; Novartis Nutrition, Canada) pentru a livra 300 ml/kg prin cateter gastric timp de 24 de ore pentru a obține un aport de energie nutrițională de 925 kJ · kg -1 -1 d -1 pentru REF/C-WN și 50% din doza recomandată de 461 kJ · kg -1 -1 d -1 pentru purceii C-MR/C-MRP (25, 26). Aportul a fost ajustat zilnic în funcție de greutate și 50% din dieta restricționată a fost suplimentată pentru a menține același aport de micronutrienți ca în grupurile REF și C-WN pentru a evita deficiențele de micronutrienți care afectează creșterea, PS sau severitatea inflamației.

Creșterea și creșterea în greutate.

Lungimea plăgii și circumferința pieptului au fost măsurate sub anestezie la momentul inițial și în ziua 14. Greutatea corporală a fost măsurată zilnic.

Glucoza plasmatică, insulina, aminoacizii, ureea și cortizolul.

Metaboliții au fost măsurați în plasma colectată în ziua 14 la 6 ore de perfuzie indicator. Insulina a fost măsurată prin RIA pentru insulina porcină (Linco Research, MO). Glucoza a fost determinată utilizând glucoză oxidază (GM7 Micro-Stat, Analox Instruments, MA). Aminoacizii au fost determinați prin HPLC cu fază inversă (Beckman Coulter) după derivatizarea automată a o-ftalaldialdehidei într-o precolumnă (27). Ureea și cortizolul au fost măsurate utilizând un analizor automat de biochimie clinică (model Hitachi 911, ON, Canada).

Analiza perfuziei și aminoacizilor.

Marcarea 1- [inel-2H5] fenilalanină (98% îmbogățit) a fost administrată ca perfuzie primară constantă (35 μmol/kg) constantă (35 μmol · kg -1 -1 h -1) timp de 6 ore la saturație în ziua 14 sângele a fost administrat tras la momentul inițial și pe oră pe parcursul perfuziei. Longissimus dorsi (LD) și fibrele musculare, reprezentând fibre musculare glicolitice cu scuturare rapidă și cu scuturare lentă, au fost îndepărtate imediat după uciderea purceilor cu pentobarbital de sodiu. Aminoacizii (derivați de n-propil ester heptafluorobutiramidă) din plasmă și mușchi au fost preparați așa cum s-a descris anterior (20). Îmbogățirea fenilalaninei a fost analizată prin cromatografie cu gaz de ionizare chimică negativă-spectrometrie de masă (Hewlett Packard Model 5988A, CA), monitorizarea ionilor [M-FH] la un raport masă-încărcare de 383 și 388, corespunzător ionilor nemarcați și etichetați. Indicator: rapoartele de urmărire au fost determinate utilizând cantitatea de ion brut și analiza indicatorului și cantitatea naturală de fenilalanină (16, 20).

Fluxul de fenilalanină a fost calculat din diluarea trombocitelor a markerului din grupul fenilalanină așa cum s-a descris mai sus (16). Rotația proteinelor din întregul corp a fost calculată din fluxul de fenilalanină pe baza conținutului de fenilalanină al purceilor (3,7 g/100 g) (28). FSR-urile proteinelor mixte din LD și masseter au fost determinate ca rata de creștere a îmbogățirii fenilalaninei legate de proteine ​​versus îmbogățirii fenilalaninei din rezervorul liber intracelular (20). Îmbogățirea fenilalaninei în proteinele plasmatice mixte a fost inițial utilizată ca înlocuitor pentru îmbogățirea proteinelor musculare inițiale sau inițiale.

Analiza factorilor de inițiere a traducerii și a proteinelor ubiquitinate totale.

Pentru a evalua efectele dietetice și probiotice asupra activării factorilor de inițiere a traducerii, am examinat fosforilarea mTOR și a substraturilor sale, p70S6K1 și 4E-BP1, numai în probele LD. Probele de LD congelate au fost prelucrate așa cum s-a descris mai sus pentru a analiza complexul eIF4E * 4E-BP1 și a fosforilat Akt, mTOR, S6K1 și proteina ribozomală S6, eIF4E, 4E-BP1 (27, 29, 30). Ca un indice al proteolizei mediată de ubiquitină, nivelurile totale de proteine ​​ubiquitinate au fost determinate în probele LD prin imunoblotare așa cum s-a descris anterior (27).

analize statistice.

Toate datele au fost analizate folosind versiunea SPSS 11.0 (SPSS Inc., Chicago, IL) și raportate ca medie ± SEM. Creșterea zilnică în greutate a fost analizată prin măsuri repetate ANOVA. Variabilele continue au fost analizate prin ANOVA unidirecțional, urmată de diferența minimă pătrată posthoc și testul Dunnett pentru comparații de grup utilizând grupul C-WN ca grup de comparație și p

Greutatea corporală zilnică a purceilor. REF, pătrate negre; C-WN, triunghiuri deschise; C-MR, inele deschise; C-MRP, pătrate gri. Media ± SEM, n = 8; * p

Rata sintezei proteinelor musculare scheletice. LD FSR (bare negre) și FSR de masă (bare albe). Media ± SEM, n = 8; * p

Panouri A - D, controale moleculare ale traducerii ARNm și proteinelor ubiquitinate. A, relativ fosforilat Akt (bare negre) și mTOR (bare albe). B, relativ fosforilat 4EBP1 (bare negre) și eIF4E * 4E-BP1 complex (bare albe). C, relativ fosforilat p70S6K1 (bare negre) și proteina ribozomală S6 (bare albe). D, proteine ​​ubiquitinate relativ totale. Media ± SEM; * p -1 -1 d- 1) și nivelul fosforilat de p70S6K1 (r = 0, 45, p

Corelațiile Pearson ale concentrației plasmatice de leucină (μmol/l) cu creșterea în greutate (A) (g · kg -1 -1 d- 1; r = 0, 46, p C-MR

macită cu macronutrienți limitați

colită și probiotice restricționate de macronutrienți