glucoză

  • abstract
  • introducere
  • Metode și proceduri de cercetare
  • obiecte
  • Tehnica de prindere hiperinsulinemică-euglicemică
  • Analizor de impedanță bioelectrică
  • Procedura analitică
  • Genotiparea polimorfismelor
  • analize statistice
  • Rezultatul
  • discuţie

abstract

Mecanismele care stau la baza rezistenței la insulină nu sunt pe deplin înțelese, dar obezitatea și factorii genetici pot fi buni candidați; Rolul țesutului adipos pare a fi foarte important deoarece nu este doar țesutul principal pentru stocarea energiei, ci este și un organ endocrin activ care secretă diverse proteine ​​care afectează în primul rând metabolismul organismului și care afectează homeostazia energetică și a glucozei. 1 Printre aceste proteine ​​se numără adiponectina, o citokină specifică țesutului adipos descoperită recent, care joacă un rol în modularea sensibilității la insulină. În plasma umană, adiponectina există ca hexameri cu greutate moleculară mică (LMW) de 180 kDa și multimeri cu greutate moleculară mare (HMW)> 300 kDa. 2 Un corp semnificativ de dovezi leagă adiponectina HMW de sensibilitatea la insulină, iar adiponectina pare să moduleze sensibilitatea la insulină prin efectul multimerilor HMW asupra ficatului. 3

Diferitele polimorfisme nucleotidice (SNP) identificate în gena adiponectinei s-au dovedit a fi asociate cu riscul de boli precum: obezitatea, rezistența la insulină, diabetul de tip 2 (T2DM) și tulburările metabolice. 4, 5, 6, 7, 8 Cu toate acestea, unele studii nu au reușit să stabilească o asociere între SNP-urile adiponectinei și indicii de rezistență la insulină derivați, cum ar fi evaluarea modelului de homeostazie a rezistenței la insulină (HOMA-IR) etc. 8, 9, 10

Au fost dezvoltate mai multe formulări pentru a evalua sensibilitatea la insulină din testele de testare a toleranței la glucoză la jeun și oral (OGTT). Clema hiperinsulinemică-euglicemică continuă să fie considerată metoda standard pentru cuantificarea sensibilității la insulină in vivo, deoarece măsoară direct efectele insulinei în promovarea utilizării glucozei în condiții standard. 11 Cu toate acestea, clema pentru glucoză nu este utilizată în studii clinice sau epidemiologice de mari dimensiuni în care sunt necesare metode mai simple.

Având în vedere aceste considerații, scopul studiului nostru a fost de a investiga posibila asociere a genei adiponectinei -11391G> A și -11377C> G SNP cu măsuri de sensibilitate la insulină evaluate prin clemă hiperinsulinemică-euglicemică la indivizi obezi necomplicați (fără boli asociate concomitente) . Au fost furnizate 12 date HOMA-IR pentru a compara rezultatele noastre cu cele raportate în literatură. 8, 9, 10 Un studiu al persoanelor obeze necomplicate care nu au primit tratament farmacologic care ar putea interfera cu efectul insulinei reduce posibilii factori de confuzie. Prin urmare, căutarea factorilor determinanți genetici ai obezității și a trăsăturilor conexe într-o populație fenotipică omogenă ar putea crește probabilitatea de a găsi loci responsabili.

Metode și proceduri de cercetare

obiecte

Din 350 de indivizi obezi consecutivi selectați din spitalul zilnic de metabolizare al Departamentului de Științe Clinice al Universității din Roma „La Sapienza”, am selectat 99 de indivizi obezi (femei = 80; bărbați = 19), cu antecedente de obezitate de cel puțin 10 ani greutate (IMC)> 30 kg/m 2, vârsta medie 35 ± 9, 5) deoarece nu au fost supuși nici unui tratament despre care se știe că perturbă parametrii legați de sensibilitatea la insulină și sindromul metabolic (hipolipemice, sensibilizatori la insulină, corticosteroizi) hormoni, acetilsalicilici acid, β-blocante, contraceptive orale, diuretice tiazidice, inhibitori ai enzimei de conversie a angiotensinei 1). În plus, acești indivizi au fost definiți ca „necomplicate”, deoarece nu aveau antecedente de IGT, T2DM, hipertensiune arterială, dislipidemie sau boală coronariană. Toți subiecții și-au dat consimțământul informat în scris pentru a participa la studiu după ce au fost informați despre natura acestuia. Protocolul de studiu a fost aprobat de Comitetul de Etică al Universității La Sapienza din Roma.

Toți subiecții obezi înscriși în studiu au avut glucoză plasmatică normală în repaus alimentar (13, 14

Analizor de impedanță bioelectrică

Masa grasă (FM) și FFM au fost estimate utilizând un analizor de impedanță bioelectrică (BIA-103; Akern, Florența, Italia) în conformitate cu ecuațiile producătorului, care conțineau date de la indivizi obezi și subiecți cu greutate normală.

Procedura analitică

Concentrațiile de colesterol și trigliceride au fost determinate în plasmă folosind un autoanalizator Technicon RA-1000; HDL a fost măsurat după precipitarea lipoproteinelor care conțin ApoB cu acid fosfatic/MgCl2. Lipoproteinele cu densitate scăzută (LDL) -colesterol au fost determinate de formula Friedewald. Nivelurile de glucoză au fost calculate prin metoda glucozei oxidazei (Autoanalyzer, Beckman Coulter, SUA). Insulina plasmatică a fost măsurată pe probe congelate prin radioimunotest (kit de insulină Adaltis, Bologna, Italia) conform instrucțiunilor producătorului, cu o limită de detectare de 16

Starea rezistenței la insulină a fost, de asemenea, estimată prin HOMA-IR conform formulei de mai sus: 15 insulină de post (mU/ml) × glucoză de post (mmol/l)/22, 5. Adiponectina serică totală a fost măsurată printr-un radioimunoanaliză de adiponectină umană (Linco Research Inc, St Charles, MI, SUA).

Genotiparea polimorfismelor

SN11 -11391 G> A și -11377 C> G au fost genotipate utilizând aplicația fluorogenă de testare 5'-nuclează ABI PRISM 7900 HT Sequence Detection System (ABI, foster City, SUA). Condițiile pentru reacția TaqMan au fost după cum urmează: 95 ° C timp de 10 minute și 35 de cicluri la 95 ° C timp de 15 secunde și 60 ° C timp de 1 minut.

analize statistice

Analiza statistică a fost efectuată utilizând software-ul statistic SPSS, versiunea 13 (SPSS, IL, SUA). Frecvențele genotipice ale SNP-urilor examinate au fost în concordanță cu echilibrul Hardy-Weinberg. Efectul polimorfismelor asupra variabilelor cantitative a fost investigat folosind analiza de regresie liniară multiplă. Valorile au fost ajustate pentru IMC, vârstă și sex; fiecare polimorfism a fost introdus în analiză ca o variabilă dihotomică.

În plus, interacțiunea dintre genotipuri și gen în ceea ce privește sensibilitatea la insulină (indicele M) a fost inclusă în model.

Nivelurile de insulină, trigliceride, HOMA-IR și adiponectină au fost transformate log 10 pentru a normaliza distribuția lor.

Am calculat că, cu dimensiunea eșantionului în acest studiu, există o performanță de 80% pentru a detecta o diferență medie de aproximativ 30% în indicele M în mod semnificativ la a = 0,05, presupunând o valoare a deviației standard. Diferența de 30% este cea observată anterior. 4

Rezultatul

Am observat că indivizii homozigoti pentru alela G la locus -11391 ai genei adiponectinei au avut niveluri mai mici de M (mg/kg min)/indicele FFM și niveluri de adiponectină comparativ cu indivizii cu genotipuri GA + AA (P = 0,002 și P = 0, 03) (Tabelul 1). ) și subiecții care purtau varianta -11377G au avut niveluri mai mici de M (mg/kg min)/FFM și adiponectină comparativ cu purtătorii (P = 0,003 și P = 0,03) (Tabelul 2). Rezultatele rămân semnificative chiar și după ajustarea pentru IMC, vârstă și sex, deși aceste două sexe nu au fost reprezentate în mod egal în eșantionul nostru. În plus, corectarea indicelui M pentru FFM poate reduce, de asemenea, diferențele dintre bărbați și femei. Valoarea P pentru interacțiunea dintre genotipuri și sex pe sensibilitatea la insulină (indicele M) nu este semnificativă statistic (P = 0,9).

Tabel în dimensiune completă

Tabel în dimensiune completă

Nu s-au observat diferențe semnificative între cei doi SNP și ceilalți parametri examinați.

Dezechilibrul de legare dintre cele două polimorfisme (D '= 0, 7) a fost similar cu cel al altei populații caucaziene. 10

discuţie

Acesta este primul studiu care analizează și identifică asocierea dintre polimorfismele -11391G> A și -11377C> G din gena adiponectinei și sensibilitatea redusă la insulină evaluată de clema hiperinsulinemică-euglicemică la indivizii obezi. Am constatat în continuare că aceste variante genetice modulează nivelurile de adiponectină.

Utilizarea unei cleme pare a fi cea mai potrivită metodă pentru evaluarea sensibilității la insulină. Într-adevăr, nu am găsit nicio asociere semnificativă statistic între HOMA-IR și variantele genetice, deși am admis doar indivizi obezi fără tratament farmacologic care ar putea interfera cu acțiunea insulinei. Lipsa asocierii observate în studiile anterioare și în prezent între indicele HOMA-IR și cele două variante genetice s-ar putea datora faptului că indicele HOMA-IR nu este o măsură directă a rezistenței la insulină, ci o valoare derivată fără sensibilitate și specificitate ridicate. de clemă hiperinsulinemică-euglicemică. Aceste descoperiri confirmă importanța determinării sensibilității la insulină in vivo folosind o clemă de glucoză într-o mică cohortă de oameni, unde utilizarea indicelui HOMA-IR este mai puțin indicată.

În concordanță cu acest rezultat, studiile anterioare care au examinat relația dintre gena adiponectinei SNP și parametrii de sensibilitate la insulină utilizând indicele HOMA-IR nu au reușit să detecteze asocierea. 8, 9, 10

Un studiu anterior realizat în populația franceză a susținut ideea că polimorfismele funcționale din regiunea promotorului (-11391G> A și -11377C> G) ale nivelurilor hormonului adiponectin-modulant al grăsimilor adiponectin-hormon sunt asociate cu nivelurile de adiponectină și contribuie la T2 riscul genetic, deși pentru a determina asocierea dintre cei doi SNP adiponectinici și indicii de rezistență la insulină (așa cum este evaluat prin insulină de post, raportul dintre insulină de post și glicemie de post și indicele HOMA-S). 10

Două studii recente, 6, 9, nu au găsit nicio asociere între variantele genetice ale genei adiponectinei și sensibilitatea la insulină printr-o clemă hiperinsulinemică-euglicemică. Stumvoll și colab. 6 au găsit mai întâi o legătură, dar și-au pierdut semnificația statistică atunci când au fost ajustate pentru IMC și procentul de grăsime corporală (P = 0, 13). Este important de reținut că în aceste studii, autorii au examinat un fenotip clinic diferit (un subgrup de pacienți indieni indieni și, respectiv, un set de date privind indivizii normali cu toleranță la glucoză, respectiv) și că au fost evaluate o clasă diferită de SNP-uri pentru adiponectină. Rezultatele conflictuale dintre studii se pot datora mai multor factori, cum ar fi: eterogenitatea populației studiate (populație, clinică), fenotip (slab, obez, durata bolii) și dezechilibru în asocierea dintre SNP. În acest sens, selectarea pacienților bine caracterizați cu obezitate pe termen lung reduce cu siguranță influența factorilor de confuzie, cum ar fi tratamentul farmacologic și patologiile legate de obezitate, crescând astfel șansa de a găsi locuri responsabile. Rezultate diferite pot fi, de asemenea, atribuite diferențelor reale în asocierea alelică cu fenotipul bolii la diferite populații.

Am constatat că subiecții care poartă genotipul susceptibilității −11391G> A și -11377C> G au niveluri semnificativ mai scăzute de adiponectină serică; întărind ipoteza unei relații între regiunea promotorului și secreția hormonală. Mai multe studii au arătat o corelație pozitivă între concentrațiile plasmatice de adiponectină și acțiunea insulinei periferice la diferite modele de șoareci și oameni. 17, 18, 19 Caracterizarea anterioară a promotorului adiponectinei uman indică faptul că cei doi promotori SNP evaluați în acest studiu sunt apropiați de o potențială secvență reglatoare și, prin urmare, pot modula activitatea transcripțională. 20, 10, 21 Am emis ipoteza că aceste două polimorfisme, sau o variantă funcțională apropiată necunoscută a LD, pot reduce nivelurile de adiponectină și, astfel, sensibilitatea la insulină.

Deși acest studiu oferă noi descoperiri, trebuie subliniate unele limitări. Distribuția de gen nu a fost reprezentată în mod egal, deși analiza statistică după corecție a dat aceleași rezultate.

În concluzie, rezultatele noastre sugerează că polimorfismele A-11391G> A și -11377C> G ale genei adiponectinei sunt asociate cu sensibilitate redusă la insulină la indivizii obezi, așa cum este evaluat de clema hiperinsulinemică-euglicemică.

Aceste polimorfisme pot contribui la predispoziția genetică la rezistența la insulină la pacienții obezi, permițând identificarea unui factor de risc important pentru complicațiile metabolice și cardiovasculare. De fapt, persoanele rezistente la insulină dezvoltă cu ușurință un sindrom metabolic complet sau parțial. În cele din urmă, capacitatea de a evalua factorii genetici sau metabolici capabili să detecteze riscul de rezistență la insulină va fi deosebit de importantă la pacienții obezi care nu au experimentat încă nicio complicație a obezității. Acești pacienți vor fi apoi încurajați cu atenție să facă schimbări în stilul de viață, cum ar fi exercițiile fizice și dieta, pierderea de grăsime și prevenirea creșterii în greutate.