abstract

Principalul

Un nou virus ARN de tip flavi, denumit GB virus-C (GBV-C) sau HGV, a fost descoperit recent prin clonarea moleculară de la pacienții cu hepatită (1, 2). Deși rolul virusului în cauzarea hepatitei, altele decât AE sau alte boli la adulți, rămâne controversat, studiile anterioare au arătat că VHG este transmis în principal pe căi parenterale, cum ar fi transfuzia de sânge, consumul de droguri, hemodializa și perfuzia cu produs plasmatic (2). –5). Alte căi posibile, cum ar fi de la mamă la copil (6-8), sexuale și transmiterea orizontală a gospodăriei, sunt încă în curs de investigare.

infecția

Deoarece nu este încă disponibil un test serologic adecvat pentru infecția acută cu VHG, metoda de selecție rămâne metoda de selecție prin identificarea genomilor virali utilizând testul de transcripție inversă-PCR.

Cele mai multe studii publicate anterior privind infecția cu VHG au fost efectuate la adulți. Prevalența infecției cu HGV la copii nu a fost suficient stabilită. ARN HGV a fost detectat la copiii cu risc (9). Unele rapoarte sugerează că infecția cu VHG a fost dobândită la o vârstă mai mică decât alte tipuri cunoscute de hepatită virală (10, 11). Examinarea infecției cu HGV la copii ar ajuta la elucidarea transmiterii și a semnificației clinice a acestui virus. Prin urmare, acest studiu a fost efectuat la indivizi normali, precum și la copii care au primit transfuzii de sânge pentru o intervenție chirurgicală pe cord deschis.

metode

Subiecte . Au fost studiați 200 de copii sănătoși, 100 de băieți și 100 de fete cu vârste cuprinse între 6 și 12 ani și cu acordul părinților. Din octombrie 1990 până în decembrie 1992, a fost efectuat un studiu prospectiv al hepatitei post-transfuzionale, implicând un total de 94 de copii. Copiii ale căror seruri conțineau anti-VHC detectabil, precum și cei cu funcție hepatică anormală înainte de transfuzie au fost excluși din acest studiu. Serurile au fost colectate înainte de operație, precum și la 1, 3, 6 și 12 luni după operație. Efectele infecției cu VHC au fost deja raportate (12). Treizeci și opt dintre acești subiecți au fost înrolați înainte de screening anti-VHC din iulie 1992, în timp ce restul de 56 de copii au fost înrolați după screening.

Probele de ser au fost alicotate cu atenție pentru a preveni contaminarea și degradarea acidului nucleic viral și stocate la -80 ° C. Activitatea ALT serică a fost măsurată pe un analizor automat. Anti-VHC a fost testat de un ELISA de a doua generație disponibil comercial (Hepatita C II; Abbott Laboratories, North Chicago, IL). Antigenele de suprafață ale virusului hepatitei B au fost verificate de RIA (Abbott Laboratories). Pacienții cu ARN HGV pozitiv au fost informați și testați corespunzător pentru ARN VHG la 5 ani după operație.

Test PCR . ARN-ul a fost extras din 50 μl de ser prin metoda tiocianat-fenol-cloroform de guanidiniu într-o etapă (13). ARN izolat a fost transcris invers așa cum s-a descris mai sus cu 200 pmol de hexamer aleatoriu (Promega Corp., Madison, WI) și revers transcriptază (Superscript, GIBCO BRL Eggenstein, Germania) la 42 ° C timp de 45 minute și inactivat la 72 ° C. C timp de 15 minute (12). PCR imbricată a fost efectuată cu primeri derivați din regiunea 5'-netradusă (14). După un început fierbinte de 94 ° C timp de 5 minute, s-au efectuat 30 de cicluri de reacție PCR cu denaturare timp de 30 s la 94 ° C, recoacere timp de 30 s la 55 ° C și extindere timp de 1 minut la 72 ° C. de PCR a fost efectuată în același mod. Zece microlitri de produse PCR imbricate au fost supuse la electroforeză în gel de agaroză 2% și colorate cu bromură de etidiu. Produsele PCR imbricate au fost de 210 pb. Au fost urmate proceduri stricte pentru a evita contaminarea pe tot parcursul procesului PCR (15). Controalele serice pozitive și negative au fost utilizate în fiecare ciclu de transcripție inversă PCR și s-au efectuat două teste separate pentru fiecare probă.

Statistici . Testul χ 2 cu corecție Yates și testul U Mann-Whitney au fost utilizate pentru analiza statistică. Valoarea P (2 - 4, 16 - 18) și 2, 1% dintre femeile însărcinate (8). Datele actuale au arătat că prevalența viremiei HGV la copiii normali nu a diferit semnificativ de prevalența populației adulte, în timp ce este mai mare decât prevalența anti-VHC la copii (19). S-a documentat că transmiterea de la mamă la copil a VHG a avut loc la o frecvență mai mare decât VHC, cu o rată de transmitere de până la 30-50% (6-8), iar acești copii infectați au fost susceptibili să dezvolte infecție persistentă. Acesta poate fi motivul pentru rata ridicată de detectare a ARN-ului HGV la copii sănătoși. Sunt necesare studii suplimentare care utilizează atât teste PCR, cât și teste serologice pentru a determina rata reală de prevalență prin detectarea infecțiilor prezente și trecute.

Infecțiile cronice cu VHG au fost frecvente în rapoartele anterioare la pacienții adulți variind de la 38 la 90% (2, 4, 16, 17). Persistența ARN-ului HGV la copii este de 96% la 6 luni și de 65% la 1 an în acest studiu. S-a observat că, cu cât pacienții sunt mai tineri, cu atât sunt mai predispuși să devină purtători cronici odată infectați cu VHG. În studiul nostru, eliminarea virusului a fost rar observată după 1 an de transfuzie. Persistența viremiei VHG a fost observată la acești copii de până la 5 ani. Durata poate fi prelungită dacă copiii transportatorului sunt monitorizați pentru o perioadă mai lungă. Capacitatea de a elimina virusul după infecția cu HGV pare să fie afectată de vârsta pacienților.

În ciuda ratei ridicate de VHG la copii, niciuna dintre aceste persoane infectate nu a dezvoltat hepatită post-transfuzională. În schimb, copiii infectați cu VHC, precum și persoanele infectate cu VHB au dezvoltat hepatită acută sau cronică. La pacienții noștri nu s-a observat niciun efect hepatotrofic al VHG. Cauza hepatitei post-transfuzionale la ceilalți doi pacienți rămâne necunoscută.

Infecțiile cu VHG nu sunt întotdeauna însoțite de VHC. Infecțiile izolate cu VHG sunt frecvente la copii și adolescenți. Orice încercare de localizare a persoanelor infectate cu VHG prin testare numai la pacienții cu infecție preexistentă cu VHC sau VHB sau la pacienți cu funcție hepatică anormală va dezvălui doar o fracțiune din cazurile infectate cu VHG.

Deși rata infecției cu HGV a scăzut de la 35% la 22% după introducerea screeningului anti-VHC, diferența nu a fost semnificativă statistic. Descoperirile noastre sugerează că screening-ul anti-VHC poate să nu prevină infecțiile cu VHG, deoarece infecțiile cu VHG predomină în populația normală, deoarece infecțiile cu VHC și infecțiile izolate cu VHG sunt frecvente.

Pe scurt, viremia VHG nu este neobișnuită la copiii aparent normali și mai mare decât prevalența anti-VHC. Copiii care au suferit o intervenție chirurgicală pe cord deschis au un risc mai mare de infecție cu VHG decât adulții. Infecția cu VHG nu a cauzat hepatită clinică la urmărirea de 5 ani. Deși au fost raportate un număr semnificativ de copii cu viremie cronică a VHG, rezultatul lor pe termen lung ar trebui revizuit.