obiecte
abstract
Este bine cunoscut faptul că transplanturile alogene de măduvă osoasă sau PBSC de la donatori histocompatibili înrudiți sau neînrudiți, administrați după condiționarea imunoablativă sau mieloablativă sau mielosupresivă, pot oferi o abordare terapeutică pentru tratamentul pacienților cu forme cu risc crescut de LLA și LMA și sunt potențial curative.formele cu risc ridicat ale acestor boli în prima remisiune. Cu toate acestea, principala limitare a eficacității acestor transplanturi este GVHD, răspunsul imun al celulelor T în grefa donatorului împotriva aloantigenelor, care sunt prezentate în esență de celulele sistemului limfo-hematopoietic al gazdei. 3, 4 GVHD acut de severitate 2-4 și care necesită terapie imunosupresivă este observat la până la 40% dintre pacienții tratați cu HLA și peste 50% dintre pacienții transplantați cu măduvă osoasă fără legătură HLA, indiferent de combinațiile de medicamente imunosupresive administrate. după transplant pentru a evita această complicație. În plus, încă 50% dintre supraviețuitori vor continua să dezvolte GVHD cronic. 7
Tehnici de epuizare a celulelor T pentru a preveni GVHD
Rolul celulelor T în patogeneza GVHD a fost elucidat mai întâi la modelele de șoarece incompatibile H2. Demonstrațiile directe inițiale ale potențialului epuizării celulelor T pentru a preveni GVHD au fost furnizate prin studii efectuate pe șoareci iradiați letal transplantați cu celule de măduvă osoasă și splină epuizate cu celule T incompatibile cu H2, fie prin eșecul dezvoltării după timectomia neonatală 8, fie prin anticorpi sau celule T care epuizează lectina din populații.celule. Astfel de transplanturi ar putea implanta și reconstitui hematopoieza și imunitatea fără inducerea GVHD acut.
De la introducerea acestei abordări, au fost evaluate mai multe metode diferite de epuizare a celulelor T, inclusiv tehnici care utilizează mai mulți anticorpi monoclonali murini direcționați împotriva antigenelor specifice celulelor T. Majoritatea acestor tehnici realizează epuizarea celulelor T de 2,2 log-clonare și necesită prevenirea completă a GVHD după profilaxia post-transplant. Anticorpul monoclonal specific CD52 Campath atinge epuizarea celulei T de 2, 5 până la 3 Log și a fost utilizat fie in vivo, fie in vitro pentru epuizarea celulelor T. Această abordare a redus semnificativ GVHD în împerecherile asociate donator-beneficiar, dar a avut un succes variabil în prevenirea GVHD la destinatarii diferiți de HLA. 16 În schimb, lectina din soia, o tehnică de epuizare a rozetei E care reduce în mod constant celulele T cu cel puțin 3 loguri 10 și tehnicile dezvoltate mai recent utilizează selecția pozitivă a celulelor progenitoare CD34 + din leucocite din sânge periferic mobilizat G-CSF care ating 4 –4. Depleția Log 10 a celulelor T a fost administrată beneficiarilor HLA-potriviți sau înșelați fără profilaxie post-transplant și este eficientă în reducerea radicală a incidenței GVHD sever acut și cronic. 17, 18, 19
Tabel în dimensiune completă
Transplantul de celule T epuizat ca platformă pentru imunoterapii adoptive
Dezvoltarea tehnicilor de epuizare a celulelor T din transplanturile de celule hematopoietice alogene care elimină necesitatea imunosupresiei post-transplant pentru a preveni GVHD a oferit, de asemenea, o platformă unică pentru investigarea terapiilor cu celule T adoptive. În absența medicamentelor imunosupresoare, celulele T transferate pot prolifera și funcționa fără inhibiții exogene. Pacienții cu transplant precoce sunt, de asemenea, marcat limfopenici, permițând proliferarea homeostatică a celulelor T transferate adoptiv la niveluri mai mari decât cele realizabile la pacienții cu populații normale de limfocite.
Programul nostru de transplant evaluează în prezent imunoterapia adoptivă cu celule T efectoare derivate din donatori de transplant pentru două indicații: (1) tratamentul sau prevenirea recidivelor tumorilor maligne hematologice; și (2) tratamentul infecțiilor virale rezistente la medicamente.
În tratamentul și prevenirea recurenței post-transplant, efectuăm studii in vitro care evaluează celulele T extinse și celulele T specifice donatorului specifice pentru epitopii peptidici proteici WT-1 la pacienții cu tumori maligne hematologice ale WT-1 +, în special formele avansate AML de SMD și mielom. În plus, am inițiat studii asupra celulelor T specifice EB transduse cu donatori de trans transdonați trans-donați care exprimă receptorul antigen himeric specific CD19 pentru tratamentul recidivelor liniei de celule B CD19 + B și a limfomului non-Hodgkin. Deoarece propriile noastre centre și alte centre au publicat deja mai multe rapoarte privind activitatea clinică a celulelor T transduse pentru a exprima CD19-specific CAR, mă voi concentra asupra studiilor noastre asupra celulelor T specifice WT-1.
În ultimii 3 ani, am analizat celulele T specifice WT-1 generate de la peste 100 de donatori normali de transplant prin sensibilizare in vitro cu celule dendritice autologe derivate din monocite încărcate cu un set de peptide 15-mer suprapuse care se întind pe WT-1 secvență proteică. Până în prezent, am identificat 41 de epitopi imunogeni nedeclarați anterior și alelele lor de clasă HLA și au demonstrat că aceste celule T specifice epitopilor restricționați HLA I sau II lizează selectiv celulele leucemice WT-1 + derivate de la un pacient de la același individ. 47
Studiile noastre I. și II. Fazele imunoterapiei adoptive a bolilor virale la pacienții cu HCT s-au concentrat pe potențialul terapeutic al celulelor T specifice virusului la (1) pacienți cu limfoame EBV + documentate patologic, în special la pacienții care nu au răspuns la Rituxan și (2) pacienți cu CMV evident boală sau viremie persistentă.rezistentă la cel puțin 2 săptămâni de terapie antivirală convențională. Celulele T utilizate în studiile noastre inițiale au fost derivate de la donatorul fiecăruia dintre pacienții cărora li s-a efectuat un transplant de grefă de celule hematopoietice. Celulele T izolate din PBMC ale fiecărui donator au fost cultivate in vitro timp de 28 până la 35 de zile după sensibilizare fie cu celule B donatoare autologe iradiate transformate cu tulpina EBV B95.8 pentru celule T specifice EBV, 53 sau cu celule dendritice autologe umplute cu un grup de peptide 15-mer suprapuse care se întind pe secvența CMVpp65 pentru celulele T specifice CMV. Cultura in vitro în această perioadă de timp selectează nu numai celulele T specifice virusului imunodominant, ci și delețiile celulelor T aloactive potențial capabile să inducă GVHD.
Rezultatele acestor studii au furnizat dovezi care să susțină potențialul acestei abordări. În primul rând, trei perfuzii săptămânale de celule T sunt sigure, fără toxicitate acută sau cazuri de denă GVHD acută sau cronică sau febră de GVHD preexistentă la doze de 1-2 × 106 celule T specifice virusului/kg/doză., au fost eficienți în îndepărtarea limfoamelor EBV și a infecțiilor cu CMV care au eșuat în terapiile convenționale, inducând CR persistente la 68% dintre pacienții cu limfom EBV care nu au răspuns la Rituxan, 53 și mai mult de 86% dintre pacienții cu infecție cu CMV sau persistente. viremie care nu a răspuns la ganciclovir, foscarnet și/sau cidofovir. 55
Limitări datorate imunodominanței celulelor T specifice CM, în acest caz celulelor T specifice peptidelor CMVpp65 prezentate de HLA B0702.
Imagine la dimensiune completă
Deoarece infecțiile cu CMV afectează predominant țesuturile gazdă, infecțiile cu CMV sunt, de asemenea, asociate cu o incidență de 3 ori mai mare a mortalității la pacienții cu transplant TLA deportați cu haplotipuri HLA 59 decât la observații la pacienții cu transplant TLA condiționat în mod similar cu celule T HLA identice. am investigat dacă limitările răspunsului celulelor T imunodominante, restricționate HLA pot fi un factor care contribuie la această incidență mai mare a infecțiilor cu CMV care pun viața în pericol. Se așteaptă ca grefele epuizate cu celule T, care transferă în mod normal 2-20x103 celule T mature/kg către gazdă, să transfere în co-transfer doar un număr mic de precursori CTL imunodominanți specifici virusului care sunt detectați la frecvențe de 1/10 3 - 1/10 4 celule T din sângele donatorilor seropozitivi infectați latent. Într-adevăr, rezultatele noastre preliminare arată că celulele T specifice CMVpp65 generate de donatori inconsistenți cu HLA-haplotip pot fi limitate la alele HLA care nu sunt împărțite de gazdă în până la jumătate din cazuri și că boala severă apare aproape exclusiv în această fracție.beneficiarii. 61
Pentru a aborda aceste limitări și pentru a controla mai eficient infecțiile virale post-transplant, atât la pacienții HLA cu depleție de celule HLA, cât și la pacienții cărora li s-au efectuat transplanturi HLA care sunt parțial identice cu sângele din cordonul ombilical sau cu transplanturi de măduvă osoasă sau PBSC asociate din seronegativ donatori., grupul nostru investiga utilizarea limfocitelor T parțial corespunzătoare HLA specifice pentru donatori terți, caracterizate anterior ca specificitate a epitopului și restricție HLA.
În concluzie, celulele T alogenice sever epuizate și administrate după chimioterapie tolerabilă mieloablativă pot asigura o aderență consistentă și o incidență mai mică a GVHD acut și cronic, fără a crește recidiva la pacienții transplantați pentru leucemie acută. Astfel de transplanturi oferă o platformă promițătoare pentru terapiile imune ale celulelor specifice tumorilor și patogenilor. Transmiterea adoptivă a celulelor T reactive la leucemie poate induce remisii la pacienții care recidivează după transplant și sunt în prezent evaluați pentru a preveni reapariția bolii. Transferul adoptiv al celulelor T specifice virusului generat de la un donator de transplant sau selectat dintr-un donator terț poate induce, de asemenea, remisii permanente ale limfoamelor EBV și infecției CMV rezistente la medicamente într-o proporție mare de pacienți. Cu toate acestea, aplicarea lor consecventă cu succes la destinatarii disciplinați HLA necesită o selecție atentă a celulelor T specifice virusului, ambele fiind restricționate de alelele HLA exprimate de celulele infectate și specifice epitopilor prezentați de aceste alele.