abstract
O mare parte din protecția pasivă oferită de antimicrobieni în laptele uman se datorează prezenței IgA aproape exclusiv sub formă dimerică sau secretorie (16). Este prezent în cele mai mari concentrații în primele zile după naștere (în colostru) și apoi scade treptat la un nivel bazal de 0,2 până la 0,3 g/l (13, 14). sIgA este mai rezistent la condițiile acide și la activitatea proteolitică a enzimelor intestinale decât IgA serică (17) și se găsește intact în cantități semnificative în materiile fecale (17, 18). Siturile de acțiune ale IgA ingerate sunt limitate, deoarece acest Ig nu poate fi absorbit în cantități semnificative din intestin (19). S-a demonstrat că laptele este absorbit pentru o perioadă scurtă de la 18 la 24 de ore după naștere (18), deși nu se cunoaște importanța pentru bebeluș.
Un număr de anticorpi sIgA au fost descriși în laptele uman împotriva antigenelor alimentare comune, bacteriilor și virusurilor la care a fost expusă mama (13, 14, 20-22). Acești anticorpi par a fi deosebit de importanți în primele câteva zile de viață, când producția de mucoasă IgA la copii este insuficientă (21, 23). După ingestie, se crede că anticorpii IgA împotriva laptelui matern protejează pasiv bebelușul prin legarea de receptorii IgA de pe suprafața luminală a enterocitelor, reducând sau prevenind astfel intrarea antigenului prin epiteliul gastrointestinal imatur (24). În modelul experimental al lui Walker și colab. (25) au arătat că anticorpii intestinali pot preveni resorbția proteinelor native și, în schimb, pot crește absorbția materialului degradat, probabil prin legarea antigenilor și expunerea lor la enzimele intestinale. Anticorpii IgA pot juca, de asemenea, un rol în excreția potențialilor alergeni alimentari din laptele uman prin formarea de complexe imune care ar putea fi fagocitate de macrofagele din laptele uman (24). În studiile preliminare anterioare, probele de colostru de la mame ai căror nou-născuți au prezentat ulterior semne de CMA (13) sau au dezvoltat CMA orală (14), IgA total scăzut (13, 14) și niveluri scăzute de IgA din lapte de vacă specific (13).
Scopul acestui studiu a fost de a determina conținutul de IgA total în lapte și lapte de vacă în colostru și lapte uman în raport cu dezvoltarea ulterioară a CMA la sugari.
metode
Subiecte.
S-au inclus într-o dietă sugarii și mamele sugarilor care au simptome sugestive ale unei alergii alimentare: alimente despre care se suspectează că cauzează simptome la sugari, de ex. Laptele de vacă, cerealele (secară, grâu, ovăz și orz), ouăle și peștele au fost excluse din dieta mamei și a bebelușului. Copiii sănătoși aveau o dietă potrivită vârstei lor. Toate mamele atopice au fost asimptomatice (fără febră de fân, eczeme, urticarie sau astm) în perioada de lactație. Mamele nu au avut medicamente în timpul studiului și au fost excluse cele care au avut mastită în ultimele 4 săptămâni.
Protocolul de studiu a fost aprobat de comitetele de etică ale Spitalului pentru piele și alergii al Spitalului Central din Helsinki și din orașul Helsinki. Consimțământul informat a fost obținut de la mame pentru colectarea probelor de lapte matern și pentru urmărirea pe termen lung a copiilor lor.
Testele cutanate.
Testele de înțepare a pielii au fost efectuate cu un extract comercial de lapte de vacă (Soluprick, Allergologisk Laboratorium A/S, Horsholm, Danemarca) pe partea abdominală a antebrațului folosind o lancetă cu un vârf de 1 mm cu un braț. Clorhidrat de histamină (10 mg/ml; Soluprick) a fost utilizat ca martor pozitiv. Reacțiile au fost roșii după 15 minute și au fost considerate pozitive dacă diametrul mediu al părului a fost ≥ 3 mm, controlul negativ a fost 0 mm, iar controlul pozitiv a fost ≥ 5 mm în același timp.
Protocol de lapte de vacă și cereale.
Colectarea probelor de lapte uman.
Prima probă de lapte uman a fost prelevată de la mame în primele 2 săptămâni după naștere și apoi la vârsta de 1, 3 și 6 ore de la copil. Au fost prelevate probe suplimentare la momentul apariției simptomelor CMA. La șapte mame, probele de lapte au fost prelevate frecvent în fiecare a treia zi pentru a determina cursul exact al nivelurilor de IgA din laptele uman. În timpul alăptării, s-au obținut în medie 2,6 eșantioane pe mamă (intervalul 1-12).
Sânii au fost spălați cu apă caldă înainte de colectarea laptelui cu o pompă de aspirație manuală. Imediat după colectare, probele de lapte uman, de la 20 la 50 ml, au fost centrifugate la 1400 x g la temperatura camerei timp de 15 minute pentru a separa stratul de grăsime. Ulterior, grăsimea a fost îndepărtată și supernatantul a fost colectat, înghețat și depozitat la -70 ° C până la determinarea ulterioară a IgA materne umane.
Detectarea anticorpilor IgA și IgA totali ai laptelui uman împotriva laptelui de vacă.
După decongelare, probele de lapte uman au fost diluate 1: 5 în PBS (pH 7,4), inclusiv 0,05% Tween 20. Restul stratului gras a fost îndepărtat prin centrifugare la 17.000 xg timp de 10 minute la 4 ° C. Supernatanții au fost folosiți pentru se determină anticorpii IgA la laptele de vacă și se diluează 1: 2 pentru a măsura IgA totală. IgA totală din laptele matern a fost determinată prin imunodifuzie radială utilizând plăci de imunodifuzie Ig-Partigen LC cu N Protein Standard SL ca calibrator conform instrucțiunilor producătorului (Dade Behring, Marburg, Germania). Rezultatele sunt exprimate în grame pe litru.
analize statistice.
Rezultatele au fost analizate de un statistician cu experiență. Datele au fost analizate folosind ANOVA pentru măsuri repetate cu mame ca grupuri. Deoarece conținutul de IgA a fost înclinat, o transformare logaritmică a fost aplicată valorilor IgA înainte de montarea modelului. Deoarece conținutul de IgA scade inițial mai repede și apoi aproape la un nivel, logaritmul vârstei copilului a fost folosit ca variabilă explicativă. În analiză, modelul de bază a fost după cum urmează: ln (vârstă) ca parte aleatorie și sistem; ln (IgA) n ln (vârstă) * (1 galerie + 1 atopie mamă + 1 simpatome), unde 1 caracter este o variabilă pointer pentru un personaj. Termenii nesemnificativi (semnificație> 5%) au fost excluși. Modelele au fost comparate de ANOVA. Testul Kruskal-Wallis a fost utilizat pentru a determina semnificația statistică a diferențelor de vârstă.
Testul χ 2 a fost utilizat pentru a determina diferențele de proporții. Analizele au fost efectuate utilizând software-ul S plus 4 (MathSoft, Inc., Seattle, WA, SUA) și software-ul StatView 4.0 (Abacus Concepts, Inc., Berkeley, CA, SUA).
REZULTATELE
Caracteristicile clinice ale populației studiate.
La urmărire, 48 de mame (69% cu constituție atopică) au avut un copil care a dezvoltat expunere clinică la laptele de vacă (14 copii cu antecedente de colici prelungite), opt (38% cu constituție atopică) au avut un copil care a colici, dar au avut o doză de provocare negativă de lapte de vacă (grupul de control al bolii) și 31 (23% cu constituție atopică) au avut un copil sănătos. S-a demonstrat hipersensibilitate la secară, grâu, ovăz și orz la 32 din 48 (67%) copii cu CMA. Durata alăptării exclusive a fost comparabilă la sugarii cu CMA, mediană de 3,5 luni (interval 0 - 7 luni); la sugarii din grupul de control al bolii, mediana a fost de 3,0 luni (interval, 1 săptămână la 6 luni); iar la sugarii sănătoși, mediana a fost de 3,0 luni (interval, 1 săptămână până la 6 luni). Dintre cei 48 de copii cu CMA, 35 (73%) au fost alăptați exclusiv la momentul simptomelor CMA. Vârsta mediană la momentul simptomelor CMA a fost de 1,3 luni (interval, 4 zile până la 4 luni) și la momentul studiului clinic de 4,9 luni (interval, 4,0 - 5,9 luni). Constituția atopică maternă corelată cu dezvoltarea CMA la sugari (p = 0 0003; testul χ 2).
Răspunsul la testul de piele de lapte de vacă a fost pozitiv la 15 din 48 (31%) pacienți CMA. În apelul clinic pentru lapte de vacă, 26 (54%) sugari au prezentat răspunsuri imediate și 22 (46%) întârziate. Doisprezece copii au avut urticarie locală imediat după aplicarea unei picături de lapte de vacă pe piele sau pe buze. Dintre ceilalți 20 de copii, au avut eczeme, cinci au avut simptome gastro-intestinale, iar 11 au răspuns atât la pielea, cât și la laptele de vacă oral gastro-intestinal. În plus față de alte simptome ale CMA, patru copii au prezentat simptome ale căilor respiratorii superioare (infecție acută a urechii medii, rinită alergică sau respirație șuierătoare).
Niveluri totale și specifice de IgA în laptele matern.
Probele de colostru (zilele 2-5) au fost obținute de la șapte mame cu un copil care a dezvoltat ulterior CMA și de la 22 de mame ale copiilor sănătoși. ANOVA pentru măsurători repetate a furnizat o valoare estimată (medie geometrică) pentru IgA în ziua 3 de 0,38 g/l (IÎ 95%, 0,24-0,82 g/l) pentru mamele care au dezvoltat CMA și 0, 82 g/l (IÎ 95% ). CI 0, 99-1, 51 g/l) pentru mamele al căror copil a rămas sănătos sau a avut colici infantile, dar nu CMA (p 
Concentrația IgA totală în laptele mamelor cu un copil sănătos (inele deschise) și la cele care au un sugar cu alergie la laptele de vacă (pătrate închise) în funcție de durata lactației. Liniile solide și punctate reprezintă mijloace geometrice modelate la mamele cu un copil sănătos și la copiii cu CMA. Pentru ambele grupuri au fost utilizate modele separate, care diferă semnificativ între ele.
Imagine la dimensiune completă
Tabel în dimensiune completă
Nivelurile de anticorpi IgA specifice laptelui de vacă în lapte corelate cu nivelurile totale de IgA (r = 0,39; p
Concentrația IgA specifică laptelui de vacă în laptele mamelor cu un copil sănătos (inele deschise) și a celor cu un copil cu CMA (pătrate închise) în funcție de alăptare. Linia continuă reprezintă diametrul geometric modelat. Un model comun a fost utilizat pentru ambele grupuri, deoarece nivelurile de IgA au fost comparabile în grupuri.
Imagine la dimensiune completă
Nivelurile de anticorpi IgA totale specifice pentru laptele de vacă și laptele matern au fost comparabile la mamele sugarilor cu colici, dar fără CMA (grupul de control al bolii) și la pacienții cu sugari sănătoși. Conținutul anticorpilor IgA total și specific împotriva laptelui de vacă din laptele uman nu s-a corelat cu atopia maternă.
DISCUŢIE
După cum sa menționat în acest studiu, nivelurile scăzute de colostru și de lapte IgA uman pot predispune descendenții la dezvoltarea CMA. Am constatat în plus că IgA total scăzut în laptele uman nu a fost asociat cu atopia maternă, ci cu starea alergică a copilului.
Sugarii pot avea, de asemenea, reacții alergice în timpul alăptării exclusive (29). S-a sugerat că reacțiile alergice la alimente la acești sugari sunt cauzate de trecerea unor cantități mici de proteine consumate de mamele care alăptează în laptele uman și detectabile prin tehnici imunologice în laptele uman (13, 27, 30). De fapt, prezența proteinelor alimentare în laptele uman nu este neobișnuită. De exemplu, beta-lactoglobulina a fost găsită în laptele a 75% dintre mamele care consumă lapte de vacă (30). Cu toate acestea, studiile anterioare au arătat că cantitățile de proteine din laptele de vacă sau produsele descompuse ale acestora excretate în lapte nu sunt legate de dezvoltarea CMA (14). Acest lucru sugerează că antigenii din laptele de vacă din laptele uman nu au fost probabil singurii factori care influențează inducerea și menținerea simptomelor alergice ale laptelui de vacă al sugarului.
Mai mulți factori, cum ar fi sIgA, contribuie la aportul controlat de antigene intestinale din intestinul subțire. Mulți dintre acești factori sunt subdezvoltați în perioada neonatală. Se raportează că acești anticorpi sIgA apar în secrețiile intestinale numai după câteva luni de stimulare antigenică intraluminală de către un precursor local al celulelor plasmatice producătoare de sIgA (31). Prin urmare, este foarte probabil ca în starea de deficit relativ de sIgA care apare în copilăria timpurie, proteinele străine să poată accesa cu ușurință circulația sistemică (24). Cu toate acestea, această tendință a intestinului imatur al nou-născuților de a permite aportul excesiv de antigeni străini peste bariera mucoasă este compensată de protecția pasivă a suprafeței intestinale asigurată în mod normal prin ingestia de colostru uman (24). Mulți factori din laptele uman pot facilita maturarea barierei intestinale, oferind în același timp anticorpi secretori în lumenul intestinal pentru a elimina antigenii străini de pe suprafața intestinală (32-34), ceea ce este probabil să reducă riscul de sensibilizare. Deficitul de IgA în lapte poate duce la expunerea crescută a mucoasei intestinale la potențiali alergeni și la creșterea riscului de alergii alimentare.
În acest studiu, nivelurile totale de anticorpi IgA la laptele matern au fost cele mai ridicate în colostru, au scăzut rapid în decurs de 1-2 săptămâni și au rămas stabile la 0,2 până la 0,3 g/l timp de câteva luni la ambele grupuri de mame. Aceste valori sunt comparabile cu valori găsite în studii anterioare (13, 14). La mamele cu copii cu CMA, scăderea a fost mai puțin pronunțată din cauza valorilor inițiale mai mici. Concentrațiile mai mari de sIgA în laptele uman în primele câteva săptămâni de lactație pot explica de ce majoritatea copiilor cu CMA nu au prezentat simptome sugestive de CMA până la vârsta de 2 până la 4 săptămâni. În acest studiu, s-au obținut mai multe probe de lapte decât în timpul alăptării de la acele mame care au dezvoltat CMA la copiii lor decât la copiii cu sugari sănătoși. Cu toate acestea, acest lucru a fost luat în considerare în modelare.
În cele din urmă, prezentăm dovezi ale unui efect protector al anticorpilor împotriva colostrului și a laptelui IgA uman împotriva dezvoltării CMA la sugari. Acest lucru poate fi legat de excreția de antigene alimentare străine pe suprafața intestinală. IgA scăzut în laptele uman poate predispune descendenții la dezvoltarea alergiilor alimentare.
abrevieri
alergie la laptele de vacă
Mulțumiri
Autorii îi mulțumesc Dr. Kaisu Juntunen-Backman pentru asigurarea facilităților, Dr. Arja Hakulinen pentru recrutarea și eșantionarea pacienților și Hanna Oksanen pentru analiza datelor statistice. Mulțumim, de asemenea, lui Marjo Leponiemi pentru asistența tehnică excelentă.