LABORATORUL DE ENDOCRINOLOGIE CELULARĂ (LBE)

endocrinologiei

1. Focusul științific al laboratorului.

Domeniul cercetării din ultimii zece ani sa concentrat pe:

a) recunoașterea rolului segmentului transmembranar al receptorului EGF în activarea căilor de proliferare a celulelor intracelulare ale receptorului EGF;

b) elucidarea modificărilor metabolismului țesutului adipos reglementat de hormoni prin acțiunea substanțelor psihotrope la șobolani;

c/elucidarea influenței sistemului endocrin asupra apariției și evoluției artritei reumatoide la om și a artritei adjuvante la animale;

d/studiul proceselor moleculare și celulare ale efectului perturbatorilor endocrini cu activitate estrogenică asupra creșterii și proliferării celulare și a proceselor de steroidogeneză în celulele granuloase ovariene.

2. Rezultatele selectate

a/Receptorul EGF este un monomer glicoproteic transmembranar (TM). Legarea ligandului inițiază dimerizarea receptorului și activarea/fosforilarea tirozin kinazei intracelulare. Calea de semnalizare a reacțiilor de fosforilare-defosforilare are ca rezultat inducerea proliferării, diferențierii, migrației și metabolismului celulelor normale. Supraexprimarea receptorilor cu activitate tirozin kinazică este prezentă în multe forme de cancer uman. Rezultatele noastre au arătat că interacțiunile dintre domeniile TM sunt o parte activă a dimerizării/activării receptorilor EGF. Prezumția de inhibare a dimerizării receptorilor prin influențarea interacțiunilor TM a fost confirmată: i) in vitro după încorporarea EGFr-TM sintetic în membrana celulelor tumorale mamare umane, ii) prin transfecția acestor celule cu ADN plasmidic care codifică TM. S-a demonstrat un efect inhibitor specific la nivelul fosforilării receptorilor și reducerii fosforilării proteinelor căii de semnalizare intracelulară (pullicații selectate 1).

c/Nivelurile hormonale din lichidul sinovial al articulațiilor pot afecta local celulele sinoviale și imune și modulează cursul inflamației reumatoide prin reglarea producției de citokine. O comparație a nivelurilor de hormoni din lichidul sinovial al genunchiului la pacienții cu poliartrită reumatoidă (RA) și a grupului de pacienți cu exudat neinflamator în osteoartrita a arătat că nivelurile de estrogeni proinflamatori din lichidul sinovial sunt crescute în lichidul sinovial. Nivelurile de testosteron au crescut, de asemenea, ușor, dar raportul estradiol/testosteron a fost semnificativ mai mare la reumatici. În plus, niveluri ridicate de progesteron, aldosteron și hormon de creștere au fost găsite în lichidul sinovial, care contribuie, de asemenea, la activarea inflamației autoimune. Prezența insulinei, a hormonului de creștere, a peptidei C și a prolactinei a fost, de asemenea, detectată în lichidul sinovial (publicații selectate 2,3).

d/Disruptorii endocrini sunt substanțe al căror efect principal este să afecteze homeostazia endocrină prin efecte mediate de receptor, sinteza sau metabolismul hormonilor. Un subgrup este xenoestrogenii, care interferează cu acțiunea estrogenilor naturali în ceea ce privește afectarea proliferării celulare (carcinogenezei) și a steroidogenezei. Acestea includ derivați de fenol și ftalat folosiți ca plastifianți, detergenți, pesticide, care pătrund în corpul uman și animal prin poluarea mediului și se eliberează în lanțul alimentar. Cel mai frecvent xenoestrogen este bisfenolul A (BPA), care la doze mari a inhibat expansiunea complexelor ovocit-cumulare porcine, maturarea ovocitelor nucleare, a blocat asamblarea meiozei și a redus producția de estradiol stimulată de FSH în celulele granuloase. Un alt rezultat original este constatarea inhibării producției bazale și stimulate de progesteron de către fenoli prin mecanismul de modulare a căii de semnalizare AMPc și a enzimelor de steroidogeneză. Efectele negative ale proceselor în celulele somatice și germinale de către xenoestrogeni pot contribui la probleme de reproducere și la creșterea incidenței bolilor maligne ale organelor de reproducere (publicații selectate 4,6,8,9,10).

3. Proceduri metodice utilizate în laborator

Studii in vitro pe linii celulare:

a) MCF7 - celule de cancer mamar aderente la om, care în cantități excesive

exprimă receptorul alfa estrogen;

b) Celule adrenocarcinom de prostată umane aderente la androgen LNCaP,

care exprimă receptori androgeni specifici în citosol și în fracțiuni nucleare:

i) măsurarea proliferării celulare și sinteza ADN de novo;

ii) măsurarea expresiei proteinelor și genelor implicate în mecanismul de proliferare

iii) măsurarea expresiei proteinelor și genelor mecanismului de acțiune anti-apoptotic;

c) Studii in vitro în culturi de celule primare - ovarian porcin

i) măsurarea activității enzimelor de steroidogeneză;

(ii) determinarea producției de mesageri secundari de semnalizare.

4. Activități curente de cercetare științifică, proiecte curente rezolvate în laborator

VEGA 2/0107/10, 2010-2012: Participarea antiapoptozei la mecanismul efectelor proliferative ale xenoestrogenilor industriali în legătură cu carcinogeneza.

Proiectul se concentrează pe o specificație mai detaliată a mecanismului efectelor proliferative ale xenoestrogenilor de tip fenolic în ceea ce privește acțiunea anti-apoptotică. În plus, proiectul își propune să elucideze efectele acestor substanțe industriale în combinație cu hormonul natural, estradiolul, în termeni de efect sinergic sau aditiv asupra creșterii celulare.

APVV-0147-10, 2011-2014. Clarificarea efectului unor perturbatori endocrini selectați crescând riscul de a dezvolta tumori de sân, prostată și ovar.

Scopul proiectului este un studiu in vitro al mecanismului de acțiune a unor perturbatori endocrini selectați și a amestecurilor acestora cu hormoni naturali asupra:

- proliferarea celulelor cancerului de sân uman și a celulelor canceroase de prostată umane - mecanisme de acțiune genomice și non-genomice;

- procesele de steroidogeneză în celulele granuloase ovariene, identificarea efectelor non-genomice asupra proceselor intrafoliculare (determinarea căilor de semnalizare intracelulară).

5. Lista granturilor străine acordate

1/EK, Bruxelles/CNRS Franța: Modularea structurii și funcției adipocitelor prin ulei de pește dietetic, CIPA-CT-92-0162, 1993;

2/INSERM, Franța: Efectele acizilor acizi de tip n-3 asupra sensibilității adipocitelor, Cooperare Est/Ouest 1994, 02/1994-12/1995;

3/INSERM, Franța: Rolul segmentului transmembranar al receptorilor tirozin kinazei: studiu pe celule individuale, 4E010B, 01/1996-12/1997;

4/EK, Brusel: 5 RP EK - Disregularea metabolismului endogen al steroizilor alterează potențial dezvoltarea sistemului neuronal și reproductiv: Efectele plastifianților de mediu, QLRT - 2004 -02637, 01/2003-06/2006;

5/ŠTEFÁNIK, proiect bilateral slovacă-francez cu biroul partener INSERM U575 din Strasbourg: interacțiuni transmembranare în semnalizarea celulară. 2006-2007.

6. Cooperarea internațională

Dr. R.H. Waring, School of Biosciences, Universitatea din Birmingham, Birmingham, Marea Britanie

Dr. D. Bagnard și dr. G. Cremel, INSERM U575, Strasbourg, Franța

Dr. O. Puig, Inst. de biotehnologie, Universitatea din Helsinki, Finlanda

Dr. Amar Bennasroune, Laborator de interacțiuni, ecotoxicologie, biodiversitate, ecosisteme, CNRS UMR 7146 Metz

Dr. Pierre Hubert, LISM, CNRS UPR 9027, Marsilia Franța

7. Selectarea celor mai importante publicații (IF ≥2) ale personalului Laboratorului de endocrinologie celulară.

1. Bennasroune A., Fickova M., Gardin A., Dirrig-Grosch S., Aunis D., Cremel G., Hubert P.: peptide transmembranare ca inhibitori ai semnalizării receptorilor ErbB. Mol Biol Cell. 2004 iulie; 15 (7): 3464-74. IF = 7.454

2. Imrich R., Rovensky J., Zlnay M., Radikova Z., Macho L., Vigas M., Koska J.: Funcția axului suprarenal hipotalamic pituritar în spondilita anchilozică. Ann. Rheum. Dis., 63, 671-674, 2004, IF 3.916

3. Mlynarcikova A., Fickova M., Scsukova S.: Efectele derivaților selectați de fenol și ftalat asupra producției de hormoni steroizi de către celulele granuloase porcine cultivate. Altern Lab Anim. 2007 mar; 35 (1): 71-7, IF 3.203

4. Mlynarcikova A., Kolena J., Fickova M., Scsukova S.: Modificări în producția de hormoni steroizi de către celulele granuloase ovariene porcine cauzate de dimfacrilat de bisfenol A și bisfenol A. Endocrinol cu ​​celule Mol. 2005 10 octombrie; 244 (1-2): 57-62, IF = 2,786

5. Mlynarcíková A., Nagyová E., Fickova M., Scsukova S.: Efectele unor perturbatori endocrini selectați asupra maturării meiotice, expansiunii cumulusului, sintezei de hialuronan și progesteron de către complexele porcine ovocit-cumulus. Toxicol In Vitro. 2009 apr; 23 (3): 371-7. IF = 2.473

6. Nagyova E., Camaioni A., Scsukova S., Mlynarcikova A., Prochazka R., Nemcova L., Salustri A.: Activarea SMAD2/3 a celulei cumulusului și căile receptorilor factorului de creștere epidermică sunt implicate în expansiunea celulelor ovocite-cumulus porcine și în steroidogeneză. Mol Reprod Dev. 2011, 78 (6): 391-402. IF = 2.395