Modificări ale sialilării proteinelor în cancerul de prostată (rezultatele unui studiu pilot)

Abstract:

Introducere:

prostată

Cancerul de prostată este una dintre cele mai frecvente forme de cancer la bărbații cu o incidență tot mai mare chiar și în țările bine dezvoltate. În ciuda diagnosticului și tratamentului disponibil, este a treia cauză cea mai frecventă de deces prin cancer la bărbați. Evaluarea nivelurilor serice ale antigenului specific prostatei joacă un rol cheie în diagnostic, dar testul are sensibilitate și specificitate scăzute. În prezent nu există nicio metodă neinvazivă fiabilă și diagnosticul de cancer de prostată trebuie confirmat biopsia. Glicozilarea anormală a structurilor celulare este o parte importantă a transformării tumorii. Scopul studiului prezentat a fost de a evalua modificările glicozilării în timpul transformării tumorii în țesutul prostatic

Metodologie:
Am analizat 24 de cazuri de boală de prostată, inclusiv cazuri de hiperplazie benignă de prostată și adenocarcinom de prostată cu diferite scoruri Gleason; 3 + 4, 4 + 4 și 4 + 5. Histochimia lectinei utilizând lectine specifice acidului sialic, Maackia amurensis leucoagglutinin (MAL), pentru legarea sa α-2,3 și Sambucus nigra leucoagglutinin (SNA) a fost utilizată pentru a evalua modificările glicozilării .) pentru legarea α-2,6. Modificările au fost evaluate semicantitativ și ulterior prin analiză morfometrică.

Rezultatele:
Transformarea tumorii în țesutul prostatic este asociată cu modificări ale glicozilării structurilor celulare. În legătură cu transformarea tumorii în prostată, am observat o scădere semnificativă a sialilării glicoconjugaților celulari, atât în ​​legarea α-2,6, cât și în α-2,3. Această scădere a fost mai pronunțată în cazurile de adenocarcinoame cu un scor Gleason mai mare.

Concluzie:
Modificările glicozilării pot afecta proprietățile funcționale ale celulelor tumorale, inclusiv supraviețuirea, invazivitatea și potențialul metastatic. Evaluarea expresiei acidului sialic în țesutul prostatic poate fi importantă în diagnosticul tumorilor de prostată, precum și pentru o mai bună înțelegere a potențialului lor malign.

Cuvinte cheie:
adenocarcinom de prostată, acid sialic, glicoconjugați, lectine, neuraminidaze, sialiltransferaze,
markeri prognostici

* Toate tabelele, graficele și cifrele care fac parte din articol pot fi găsite în fișierul PDF atașat la sfârșitul studiului.

Introducere

Cancerul de prostată este una dintre cele mai frecvente forme de cancer la bărbați. Statisticile raportează peste un milion de cazuri noi pe an la nivel mondial. În Slovacia, incidența cancerului de prostată la bărbați este a doua doar după cancerul de colon și are o tendință în creștere. Între 2000 și 2010, incidența sa aproape sa dublat (o poză 1). În ciuda diagnosticului și tratamentului disponibil, este a treia cauză principală de deces prin cancer la bărbați (1).

Valoarea predictivă slabă a examinării PSA a dus la supra-diagnosticarea modificărilor bolii de prostată (4). Pe baza studiilor în curs de desfășurare, inclusiv Studiul randomizat european de screening pentru cancerul de prostată (ERSPC), Asociația Europeană de Urologie a constatat inițial că condițiile pentru un screening larg al cancerului de prostată la întreaga populație nu au fost îndeplinite în mod clar și a recomandat ca numai pacienții să fie verificat/oferit.după instrucțiuni de risc adecvate (5.6). Datorită incidenței crescânde a bolii, există în prezent discuții ample despre necesitatea screeningului cancerului de prostată la nivelul întregii populații. Din acest motiv, este important să căutați noi proceduri de diagnosticare și markeri care pot fi utilizați în diagnosticare. Societatea Europeană de Urologie a solicitat Comisiei Europene să își intensifice sprijinul și finanțarea pentru această cercetare.

Un nou marker în diagnostic ar putea fi acidul sialic. Acidul sialic este o monozaharidă care se exprimă în procesul de sialilare pe părțile terminale ale glicoproteinelor de pe suprafața celulei. Acizii sialici se găsesc pe glicanii legați de Naj O, adesea atașați la reziduul bazic de galactoză, cel mai adesea printr-o legătură glicozidică α-2,6 sau α-2,3 (7). Această monozaharidă este importantă în interacțiunile celulă-celulă, precum și între celule și micromediul înconjurător. Acesta joacă un rol crucial în stabilizarea structurii glicoproteinei și în determinarea caracteristicilor suprafeței celulare (8,9).

Sialilarea modificată însoțește adesea transformarea malignă, contribuind la creșterea agresivității și creșterii tumorii. Celulele tumorale dobândesc noi proprietăți care le permit să scape de sistemul imunitar al organismului, afectează capacitatea de a invada țesutul înconjurător și de a metastaza. În multe tumori, s-a demonstrat că o modificare a sialilării proteinelor este legată de comportamentul biologic al tumorii și de prognosticul pacientului. Sialilarea afectează apoptoza (10), neovascularizarea (11) în tumoră și are un efect asupra rezistenței la chimioterapie și radioterapie (12,13). Modificările nivelurilor de acid sialic pot fi, de asemenea, demonstrate în serul pacienților. O diferență a nivelurilor serice de acid sialic a fost constatată la pacienții cu leziuni benigne și malignități (9).

Prin urmare, evaluarea sialilării ar putea reprezenta un marker de prognostic sau de diagnostic interesant în ceea ce privește utilizarea sa posibilă în biopsia lichidă. Scopul prezentului studiu a fost, prin urmare, de a evalua schimbările în sialilarea glicoconjugaților în raport cu transformarea tumorii în țesutul prostatic.

Metodologie

Baza studiului a fost preparatele microscopice de arhivă ale țesutului prostatic fixat cu formalină și încorporat în parafină din sursele Institutului de Anatomie Patologică, Facultatea de Medicină, Universitatea Charles. Conform diagnosticelor patologice stabilite, am selectat un total de 24 de probe. Ne-am concentrat asupra cazurilor de modificări non-tumorale de prostată (6 pacienți), adenocarcinom de prostată cu diferite scoruri Gleason; 3 + 4 (6 pacienți), 4 + 4 (6 pacienți) și 4 + 5 (6 pacienți).

Le-am evaluat în mod repetat histopatologic conform criteriilor publicate de OMS. Am realizat două secțiuni paralele din diapozitive selectate și le-am colorat histochimic cu două tipuri de lectine. Am folosit aglutinină Sambucus nigra (SNA) specifică pentru legarea α-2,6 și leucoagglutinină Maackia amurensis (MAL) specifică pentru legarea α-2,3 a acidului sialic. Preparatele decarate au fost clătite timp de 5 minute în PBS (în soluție salină tamponată cu fosfat cu 0,5% BSA, 0,05% NaN 3 0,005% Tween, pH 7,2). Lamelele au fost incubate timp de 90 de minute în soluție/ml SNA biotinilat și MAL (Vector, Carpinteria, CA) la temperatura camerei. După clătire de trei ori în PBS, lamelele au fost incubate cu complex de streptavidină peroxidază timp de 30 de minute și, după clătire repetată, colorate cu soluție de diaminobenzidină timp de un minut. Lamele au fost apoi colorate cu hematoxilină.

Am evaluat preparatele la microscopul luminos, ne-am concentrat pe evaluarea pozitivității membranei citoplasmatice și luminale a markerului evaluat. A fost evaluată întreaga zonă a preparatului, scorul Gleason a fost determinat pentru fiecare câmp evaluat și fiecare câmp a fost ulterior evaluat separat. Am exprimat constatările semiquantitativ folosind un scor semiquantitativ după cum urmează:

  • negativitate 0,5 slab, resp. pozitivitate neregulată
  • pozitivitate regulată bine evaluabilă
  • puternică pozitivitate regulată
  • pozitivitate regulată foarte puternică

În pasul următor, am cuantificat intensitatea pozitivității folosind software-ul histomorfometric ImageJ, v. 1,52p (14,15) și exprimat ca scoruri de intensitate DAB (SDI), unde 0 este intensitatea teoretică minimă, 1 este intensitatea teoretică maximă. Scorul semicantitativ de pozitivitate DAB (SDP) este exprimat ca media evaluărilor individuale ± SEM. Rezultatele au fost evaluate statistic folosind software-ul statistic Graph Pad Prism utilizând testul neparametric Kruskal-Wallis, valori p Site-ul nostru web folosește cookie-uri. Acestea sunt utilizate, de exemplu, pentru a analiza traficul către acest site sau pentru a îmbunătăți site-ul prin statistici anonime și pentru a personaliza reclame.
Navigând pe site, sunteți de acord cu principiile protecției datelor cu caracter personal și cu utilizarea cookie-urilor. Sunt de acord Politica de confidențialitate