ansamblu

Deși primul val al pandemiei globale a noului coronavirus a fost gestionat cu succes de țara noastră, dezvoltarea actuală și cazurile în creștere ale bolii asociate cu deschiderea economiei indică apariția celui de-al doilea val. Testarea va continua să joace un rol cheie în contextul sistemului general de monitorizare a coronavirusului SARS-CoV-2. Prin urmare, am decis să îi acordăm mai multă atenție.

Tehnologii disponibile pentru testarea COVID-19

În prezent sunt disponibile mai multe tipuri de teste pentru COVID-19. De asemenea, sunt cheltuite fonduri semnificative pentru dezvoltarea de noi. Vom încerca să vă explicăm cum funcționează testele individuale, care sunt avantajele și dezavantajele acestora și pentru ce sunt folosite.

În general, distingem două grupuri mari de teste:

  • Testele de diagnostic detectează prezența virusului în sine în organism și identifică infecția în curs. Acestea sunt utilizate pentru confirmarea infecției cu COVID-19. Folosesc tampoane din faringe și nazofaringe. Patia sem:

- teste moleculare (RT-PCR, RT-qPCR, NAAT)
- teste antigenice

  • Testele serologice (testele anticorpilor) sunt utilizate pentru a determina posibilitatea infecției cu coronavirus în trecut. Aceste teste detectează prezența anticorpilor în sânge, adică răspunsul imun al organismului, care apare la doar câteva săptămâni de la apariția simptomelor bolii. Ei pot determina nivelul de infecție într-o populație, dar nu pot detecta boala suficient de devreme în scopul diagnosticării bolii și găsirii contactelor.

Să analizăm fiecare tip separat.

Teste moleculare

Aceste teste, cunoscute sub numele de PCR, qPCR, RT-PCR, detectează prezența materialului genetic al unui virus sau al acidului nucleic viral (ARN sau ADN).

  • ADN - acidul dezoxiribonucleic - este o moleculă în care majoritatea organismelor vii își păstrează codul genetic. ADN-ul conține informații pe care celulele le folosesc pentru a produce proteine.
  • ARN - acid ribonucleic - îndeplinește mai multe funcții, dar sarcina sa principală este copierea informațiilor genetice din ADN (transcripție) pentru a produce proteine ​​(traducere).

PCR (Polymerase Chain Reaction) este o metodă foarte fiabilă, sensibilă și, prin urmare, adesea utilizată pentru detectarea urmelor de material genetic (ADN sau ARN) a oricărui microorganism, virus sau bacterie. Această tehnologie este utilizată de mai bine de 30 de ani. PCR poate captura gene specifice din materialul genetic obținut din tampoane de gât și nas și îl poate înmulți cu o reacție chimică, astfel încât să poată fi capturat cu un colorant fluorescent. De aici și denumirea de reacție în lanț a polimerului.

O variantă a acestei metode, cunoscută sub numele de RT-PCR (Reverse Transcription PCR), este utilizată pentru a detecta prezența coronavirusului SARS-CoV-2. Acest lucru se datorează faptului că coronavirusul SARS-CoV-2, ca și alți viruși, nu conține ADN, ci doar ARN. Când corpul uman este infectat cu un astfel de virus, se întâmplă de fapt să se infiltreze în celulele sănătoase ale corpului uman care produc ARN-ul nostru și să le manipuleze astfel încât să nu producă proteine ​​umane, ci proteinele virusului. Acestea se vor transforma în fabrici de viruși.

O enzimă este utilizată pentru a detecta ARN-ul viral, care transformă ARN-ul virusului în ADN. Acest lucru se face într-un proces într-un singur pas numit transcriere inversă. Ulterior, procesul continuă ca în PCR, ADN-ul viral este multiplicat de un milion de ori și detectat de un colorant fluorescent. Această metodă este foarte fiabilă deoarece o singură particulă prezentă în tamponul faringian sau nazofaringian este suficientă pentru a detecta prezența virusului în organism.

Ce înseamnă rezultatele testelor?

  • Subiectul are o infecție acută cu COVID-19.

  • Subiectul testat nu este infectat în prezent cu virusul.
  • Virusul nu este prezent la locul unde a fost prelevat tamponul (prin urmare, o probă este prelevată atât din nas, cât și din gură ca standard). Într-o etapă ulterioară, virusul se deplasează mai jos și, deși este prezent în plămâni, nu se găsește în faringe și nazofaringe.
  • Boala este prea devreme sau a apărut deja și este prea târziu. Un rezultat negativ nu înseamnă că testul va fi negativ mâine sau în câteva zile și, respectiv, în prezența factorilor de risc. trebuie repetat după apariția simptomelor.

Care sunt avantajele și dezavantajele metodei RT-PCR?

RT-PCR este o metodă foarte sensibilă, robustă și bine documentată. RT-PCR este în prezent cea mai fiabilă metodă pentru diagnosticarea COVID-19. Această metodă este, de asemenea, mai puțin predispusă la contaminare, întrucât întregul proces are loc într-un tub închis.

Principalul său dezavantaj constă în faptul că necesită echipamente specializate și instruire a personalului, deci se efectuează numai în laboratoare specializate. Acest lucru afectează și atunci când rezultatul este disponibil (de obicei în 48 de ore).
Această metodă poate detecta doar o infecție în curs, deoarece atunci când virusul nu mai este în organism, nu îl poate detecta. Această metodă este insuficientă pentru a identifica și monitoriza pacienții care s-au recuperat deja de la COVID-18. Dacă ați depășit boala, niciuna dintre metodele moleculare nu vă va spune. Acest lucru creează o anumită incertitudine, mai ales dacă ați fost în carantină voluntară din cauza doar simptomelor minore sau neclare. O metodă suplimentară într-un astfel de caz sunt testele serologice, despre care scriem mai târziu în articol.

Testele antigenului

Ce este un antigen?

Sistemul imunitar uman, dar și sistemul imunitar al tuturor vertebratelor, funcționează pe un singur principiu de bază: fiecare proteină din corp care nu poartă codul propriilor gene este cel mai probabil un agent patogen care trebuie găsit și distrus. Când sistemul imunitar descoperă o proteină străină, globulele albe din sânge încep să producă anticorpi pentru ao găsi și a o distruge. Proteina străină care declanșează această întreagă reacție se numește antigen deoarece generează anticorpi (anticorp).

Cum funcționează testele antigenice?

Testele antigenice își au numele derivat din faptul că caută antigeni, i. j. proteine ​​specifice virusului. La fel ca testul antigripal, testele antigenice pentru un nou coronavirus folosesc anticorpi pe animale care „vânează” proteinele virusului de pe suprafața acestuia (numite glicoproteină Spike sau S).

Tampoane din mucoasa faringiană și nazofaringiană sunt utilizate pentru test, precum și pentru testul PCR. Acestea sunt apoi plasate în fluid pentru a elibera virusul din probele obținute. Lichidul este apoi aplicat pe suprafața unei lame de testare care acoperă anticorpii. Anticorpii sunt aderați la o lamă de testare și atașați la proteinele virusului prezente în probă. Anticorpii suplimentari sunt apoi aplicați pe lamela de testare, care sunt colorate chimic pentru a fi vizibili, fie cu ochiul liber, fie sub iluminare fluorescentă. Dacă eșantionul conține antigeni virali, aceștia sunt atașați de două tipuri de anticorpi: unul îi lipeste de lamela de testare, iar celălalt îi face vizibili. Cu cât eșantionul conține mai multe virusuri, cu atât urmele culorilor sunt mai vizibile. Dacă proba este pozitivă, liniile colorate vor apărea pe diapozitivul de test în termen de 15-20 de minute.

Ce înseamnă rezultatele testelor?

  • Subiectul are o infecție acută COVID-19.

  • Subiectul testat nu este infectat în prezent cu virusul.
  • Virusul nu este prezent la locul unde a fost colectat tamponul sau este prea scăzut.
  • Boala este prea devreme sau a apărut deja și este prea târziu. Dacă este prea devreme, testul trebuie repetat.

Avantajele și dezavantajele testelor antigenice

Principalul avantaj este viteza și ușurința de utilizare în comparație cu testele PCR, întrucât întregul test durează 15-30 de minute și necesită puțină experiență. Probele nu sunt trimise la laboratoare.

Un test pozitiv poate diagnostica boala COVID-19 în curs de desfășurare. Aceasta înseamnă că, dacă treceți acest test, aveți garantat că aveți COVID-19. În plus, acest test este o alternativă ieftină în comparație cu testele moleculare (RT-PCR).

Pe de altă parte, testele antigenului arată doar dacă persoana testată este infectată în prezent cu un coronavirus. Antigenii nu sunt prezenți înainte sau după boală, deoarece această metodă se bazează și pe detectarea unor părți ale virusului.

Comparativ cu testele moleculare, aceste teste sunt mai puțin sensibile, deoarece nu înmulțesc particulele de virus decât testul RT-PCR. Dacă există prea puține antigene în probă, testul nu le detectează, ceea ce înseamnă mai multe negative negative.

Deși este o tehnologie de testare consacrată, testele antigenice pentru COVID-19 abia încep. Testul este aprobat în prezent de Quidel. Testele antigenice sunt o metodă foarte rapidă de testare a prezenței acute a infecției COVID-19 și au un potențial mare. Cu toate acestea, acestea arată o rată relativ ridicată de rezultate fals negative (până la 20%). În combinație cu teste moleculare de precizie (PCR) și teste de anticorpi, acestea joacă un rol important în obținerea unei imagini generale a răspândirii infecției cu coronavirus într-o populație.

Teste serologice (teste de anticorpi)

Testele serologice pentru COVID-19 vizează detectarea anticorpilor specifici din sânge care se leagă de antigenii coronavirusului. Aceste teste determină dacă o persoană a depășit COVID-19 în trecut. Oricine a depășit boala va avea anticorpi specifici în sânge împotriva agentului patogen la care a fost expus. Sistemul imunitar începe să producă anticorpi ca parte a procesului de combatere a infecțiilor. Anticorpii rămân în sânge după ce boala a trecut. Aceasta înseamnă că testul anticorpului nu poate spune dacă persoana care este testată are o infecție în curs.

Ce anticorpi sunt detectați prin teste serologice pentru COVID-19?

Corpul uman produce până la 5 tipuri de anticorpi - imunoglobuline, fiecare dintre ele jucând un rol de neînlocuit în funcționarea sistemului imunitar. Testele serologice COVID-19 se concentrează pe IgM, IgG, IgA și anticorpi totali. Cu toate acestea, cercetările în acest domeniu sunt încă în desfășurare și coronavirusul arată, de asemenea, anumite specificități în producția de tipuri individuale de anticorpi.

  • Anticorpii IgM reprezintă primul răspuns al organismului la infecție. Nu sunt specifice virusurilor individuale, au capacitatea de a se lega de antigeni multipli pentru a le elimina rapid în timpul infecției primare. Acestea sunt cele mai mari, dar reprezintă doar 10% din numărul total de anticorpi. Se formează cam din a 7-a zi de la debutul infecției.
  • Anticorpii IgG sunt cei mai mici și mai numeroși, reprezentând până la 80% din cantitatea totală de anticorpi. Ele apar de obicei mai târziu în infecție ca o reacție secundară a sistemului imunitar. Deoarece sunt cele mai specifice pentru anumite virusuri și rămân cele mai lungi din sânge, ele joacă un rol cheie în imunitatea la o anumită boală și, prin urmare, la COVID-19. Acestea se formează mai târziu și pot dura câteva luni, ceea ce este în prezent cercetat.
  • Anticorpii IgA au rolul de a proteja suprafețele mucoasei și sunt prezenți în serul sanguin, secrețiile, saliva, lacrimile, transpirația și laptele matern. De asemenea, se formează la debutul bolii împreună cu anticorpii IgM.

Cum funcționează testul serologic?

Există mai multe metode care sunt utilizate pentru a testa anticorpii împotriva unui nou coronavirus. Una dintre ele este metoda ELISA (din testul imunosorbent enzimatic legat de enzime, care înseamnă test imunoabsorbent legat de enzime), care este, de asemenea, utilizat pentru testarea laboratoarelor slovace Alpha medical.

Eșantionul de sânge este trimis la laborator, unde este amestecat treptat cu anticorpi, antigeni și enzime împreună cu o moleculă care schimbă culoarea. Dacă proba este pozitivă pentru anticorpii împotriva coronavirusului SARS-CoV-2, această moleculă își va schimba culoarea. Schimbarea culorii poate fi detectată cu ochiul liber sau cu un dispozitiv numit spectrofotometru.

Ce înseamnă rezultatul testului?

  • Prezența anticorpilor în sânge indică probabil un rezultat pozitiv pentru COVID-19 în trecut.
  • Prezența anticorpilor nu înseamnă neapărat că au luptat împotriva COVID-19; se pot forma din cauza unei alte infecții sau boli. Prin urmare, factorii de risc trebuie luați în considerare pentru a confirma boala. Dacă persoana testată nu a întâlnit coronavirusul, este foarte puțin probabil să fi depășit boala.

  • Persoana testată nu are anticorpi împotriva COVID-19 și, prin urmare, este puțin probabil să fie imună la boală.
  • Deoarece producția de anticorpi durează ceva timp dacă o probă de sânge a fost prelevată prea repede după infecție, un rezultat negativ poate să nu indice absența COVID-19. După luarea în considerare a factorilor de risc și a simptomelor, testul trebuie repetat în acest caz.

Care sunt avantajele și dezavantajele acestei metode?

ELISA este o tehnologie de laborator foarte simplă și ieftină, care a fost bine documentată și utilizată în medicină de mulți ani. ELISA este o metodă foarte fiabilă și sensibilă: atinge o sensibilitate (capacitatea de a determina cu precizie un rezultat pozitiv) de 100% după 12 zile de la apariția simptomelor și specificitatea (capacitatea de a determina cu exactitate un rezultat pozitiv) până la 98%. Prin urmare, să nu confundăm acest test cu teste unice pentru anticorpi care utilizează sânge dintr-o înțepătură de deget și au o sensibilitate și fiabilitate mai scăzute.

Testele ELISA pot fi efectuate pe mai multe probe (până la 96) simultan, deci pot fi utilizate pentru a testa rapid un număr mare de pacienți.

Proba de sânge prelevată trebuie trimisă la laborator, ceea ce afectează și disponibilitatea rezultatelor (de obicei în decurs de 48 de ore).

Dezavantajul acestei metode este că nu poate determina în mod fiabil boala COVID-19 în curs.

Care este potențialul testării anticorpilor și când trebuie utilizat?

Testele serologice sunt de mare utilitate în identificarea persoanelor care au depășit COVID-19. Pentru autoritățile epidemiologice, acestea oferă o imagine de ansamblu asupra răspândirii virusului și a bolii în sine, a ratei de răspândire a acestuia, a mortalității sale și, indirect, a imunității sale colective.

Este o informație importantă pentru fiecare dintre noi. Acest lucru este susținut de faptul că marea majoritate a persoanelor cu COVID-19 nu prezintă niciun simptom al bolii.

Se crede că atât în ​​cazul altor boli, cât și după depășirea bolii COVID-19, anticorpii rămân în sânge și asigură astfel protecția organismului împotriva bolilor recurente. Cercetătorii din întreaga lume încearcă să găsească răspunsuri la întrebări precum câți anticorpi sunt necesari pentru a asigura imunitatea la coronavirus și cât de mult poate persista o astfel de imunitate.

Testele serologice nu pot fi utilizate pentru diagnosticarea cazurilor acute de COVID-19 sau ca dovadă a neinfecțiozității atunci când călătoriți în străinătate sau reveniți la locul de muncă. Acest lucru necesită un test RT-PCR.
Testele serologice au un potențial mare în utilizarea lor viitoare pentru a identifica potențiali donatori de plasmă din sânge care ar putea salva viețile celor cu un curs serios de COVID-19. În timpul dezvoltării vaccinului, acestea pot fi utilizate pentru a detecta răspunsul imun al organismului.